Les méthodes de vaccination actuelles contre l’influenza, axées sur la réponse à
anticorps dirigée contre des antigènes hautement variables, nécessitent la production d’un
vaccin pour chaque nouvelle souche. Le défi est maintenant de stimuler simultanément une
réponse cellulaire pan-spécifique ciblant des antigènes conservés du virus, tel que la
protéine de la matrice (M1) ou la nucléoprotéine (NP). Or, la présentation antigénique de
ces protéines est peu définie chez l’humain. Nous avons analysé la présentation endogène
par les complexes majeurs d’histocompatibilité de classes (CMH)-I et -II de M1 et de NP.
Ainsi, les protéines M1 et NP ont été exprimées dans des cellules présentatrices
d’antigènes (CPAs). Notamment, des épitopes de M1 et de NP endogènes peuvent être
présentées par CMH-I et -II, ce qui résulte en une activation respectivement de
lymphocytes T CD8+ et CD4+ précédemment isolés. Étant donné l’importance des
lymphocytes T CD4+ dans la réponse cellulaire, nous avons cloné M1 ou NP en fusion avec
des séquences de la protéine gp100 permettant la mobilisation vers les compartiments du
CMH-II sans affecter la présentation par CMH-I. Des CPAs exprimant de façon endogène
ces constructions modifiées ou sauvages ont ensuite été utilisées pour stimuler in vitro des
lymphocytes T humains dont la qualité a été évaluée selon la production de cytokines et la
présence de molécules de surface (ELISA ou marquage de cytokines intracellulaire). Nous
avons observé une expansion de lymphocytes T CD8+ et CD4+ effecteurs spécifiques
sécrétant diverses cytokines pro-inflammatoires (IFN-γ, TNF, MIP-1β) dans des
proportions comparables avec une présentation par CMH-II basale ou améliorée. Cette
qualité indépendante du niveau de présentation endogène par CMH-II de M1 et de NP des
lymphocytes T CD4+ et CD8+ suggère que cette présentation est suffisante à court terme.
En outre, la présentation endogène de M1 et NP a permis de stimuler des
lymphocytes T spécifiques à des épitopes conservés du virus, tel qu’identifié à l’aide une
méthode d’identification originale basée sur des segments d’ARNm, « mRNA PCR-based
epitope chase (mPEC) ». Ensemble, ces nouvelles connaissances sur la présentation
antigénique de M1 et de NP pourraient servir à établir de nouvelles stratégies vaccinales
pan-spécifiques contre l’influenza. / New vaccines targeting hyper-variable influenza determinants must be prepared
against every new strain. The challenge is now to develop influenza vaccines also eliciting
a strong and sustained cytotoxic response against highly-conserved determinants such as
the matrix (M1) and nuclear (NP) proteins. However, their antigenic presentation properties
in humans are less defined. We, therefore, analyzed major histocompatibility complex class
(MHC)-I and -II presentation of endogenously processed M1 and NP in human antigen
presenting cells (APCs).
To do so, we used APCs endogenously-expressing the M1 and NP proteins. M1 and
NP epitopes can be presented by MHC-I and -II, which results in the activation of
previously-isolated antigen-specific CD8+ and CD4+ T lymphocytes. Considering the
importance of CD4+ T lymphocytes in the cellular immune response, we cloned M1 and NP
proteins in fusion with gp100 MHC-II enhancing sequences, which do not disrupt MHC-I
presentation. APCs expressing MHC-II-enhanced or wild type constructs were used to
stimulate human T lymphocytes in vitro and quality of antigen presentation was evaluated
on the basis of cytokine production and cell surface molecule expression (ELISA or
intracellular cytokine staining). We expanded antigen-specific effector CD8+ and CD4+ T
lymphocytes which secreted pro-inflammatory cytokines (IFN-γ, TNF and MIP-1β) to
similar extents both with and without MHC-II enhancement. The quality of CD4+ and
CD8+ T lymphocytes generated independent of the level of M1 and NP endogenous MHCII
presentation suggests that this presentation is sufficient for short-term T lymphocyte
stimulation.
Thus, endogenous expression of M1 and NP have stimulated T lymphocytes
specific to conserved influenza epitopes, as determined by an original identification
technique based on mRNA segments called mRNA PCR-based epitope chase (mPEC).
Overall, these new insights about T lymphocytes expanded following MHC-I and -II
presentation of endogenous M1 and NP could prove useful for new complementary
heterosubtypic vaccination strategies.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMU.1866/4928 |
| Date | 08 1900 |
| Creators | Doucet, Jean-Daniel |
| Contributors | Réjean, Lapointe |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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