Šio darbo tikslas buvo nustatyti ar NAD(P)H fluorescencija, registruojama neinvaziniu fluorescenciniu metodu, gali būti naudojama kaip miogeninių ląstelių diferenciacijos žymuo, ištiriant fluorescencijos pokyčius miogeninių ląstelių diferenciacijos metu bei išaiškinant pagrindines šių pokyčių priežastis. Tyrimai parodė, kad 95 % mioblastų fluorescencijos, išmatuotos prie 460 nm emisijos, priklauso nuo NAD(P)H kiekio. Ląstelėms diferencijuojantis fluorescencija ženkliai didėja, tačiau susiejus fluorescenciją su didėjančiu baltymų kiekiu, ženklus fluorescencijos padidėjimas nustatytas tik po 10 diferenciacijos dienų. Panaudojus ląstelių metabolizmą ir NAD(P)H kiekį veikiančius veiksnius (skyriklį CCCP ir slopiklį KCN) buvo įvertinti santykiniai NADH ir NAD+ kiekiai bei NAD+/NADH santykis, kuris diferenciacijos metu mažėjo. 535 nm fluorescencijos pokyčiai diferenciacijos metu atskleidžia didėjantį FAD kiekį. Tiek NAD+/NADH santykis tiek 535 ir 460 nm fluorescencijos emisijų santykis yra patikimesni diferenciacijos rodikliai nei pati NAD(P)H fluorescencija. Šio darbo rezultatai patvirtina, kad tokie greiti, tikslūs ir neinvaziniai fluorescencijos matavimai gali būti naudingi nustatant mioblastų diferencacijos pradžią ir vyksmą bei taikytini įvairiems bandymams siekiant nustatyti vaistų ir kitų faktorių įtaką ląstelių metabolizmui. / The aim of this study is to check hypothesis that increase of fluorescence at 460 nm emission upon myoblast differentiation display alteration of NADH quantity that change NAD+/NADH ratio and could be a myoblast marker of entering into differentiation process. To evaluate NAD(P)H influence on total cell fluorescence emission intensity at 460 nm wavelenght were used metabolism effectors: carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone (CCCP) to obtain minimal NADH fluorescence; and KCN to obtain maximal NADH fluorescence. Assuming, that CCCP caused maximal oxidation and that KCN caused maximum reduction, estimated that NAD+/NADH ratio decreased upon myoblast differentiation. CCCP effect showed that about 95 % of myoblast fluorescence at 460 nm emission is dependent on NAD(P)H. The fluorescence intensity at 460 nm was increasing with myoblast differentiation. Using fluorescence measuring estimated average NADH concentration significantly increased on 10 day of differentiation compared with control cells. Changes of fluorescence intensity at 535 nm reveal accumulation of FAD upon myoblast differentiation. Therefore, the best indicator of myoblast differentiation stage is ratio of fluorescence emission at 535 and 460 nm. Our results indicate that quick, quantitative and real-time fluorescence method may be useful for non-invasive detection and evaluation of myoblast differentiation stage.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LABT_ETD/oai:elaba.lt:LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20110615_103737-60124 |
| Date | 15 June 2011 |
| Creators | Bružas, Saulius |
| Contributors | Degutytė-Fomins, Laima, Paulavičiūtė, Brigita, Vytautas Magnus University |
| Publisher | Lithuanian Academic Libraries Network (LABT), Vytautas Magnus University |
| Source Sets | Lithuanian ETD submission system |
| Language | Lithuanian |
| Detected Language | English |
| Type | Master thesis |
| Format | application/pdf |
| Source | http://vddb.laba.lt/obj/LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20110615_103737-60124 |
| Rights | Unrestricted |
Page generated in 0.002 seconds