[pt] Os antibióticos eritromicina e canamicina, pertencentes às
classes dos
macrolídeos e aminoglicosídeos respectivamente, têm sua
importância como
agentes preservativos no processo de preparação e durante
o processo de
utilização da vacina contra a febre amarela - apresentação
de cinco doses -
produzida no Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos,
Bio-Manguinhos,
FIOCRUZ, RJ. Este trabalho propõe apresentar duas novas
abordagens para a
determinação espectrofluorimétrica desses antibióticos,
considerando o
desempenho, inclusive com relação à seletividade, na
análise dessa matriz
específica (vacina). Um estudo preliminar do comportamento
luminescente
(fosforescência e fluorescência) dessas substâncias foi
realizado em diferentes
condições experimentais a fim de encontrar as que
permitissem o
desenvolvimento dos métodos analíticos. Para a
eritromicina, que não apresentou
luminescência nativa, foi utilizado um procedimento de
derivação fotoquímica de
soluções do analito preparadas em meio contendo ácido
sulfúrico. Como resultado
obteve-se um foto-produto que apresentou fluorescência em
412/465 nm. As
condições experimentais foram otimizadas visando a
maximização desse sinal
fluorescente. Nesse caso, foram estudados o tempo de
irradiação com UV, o tipo e
a concentração do ácido utilizado, o tempo e a temperatura
de aquecimento. O
método foi parcialmente validado apresentando limites de
detecção e de
quantificação iguais a 0,25 ug mL-1 e 0,85 ug mL-1
respectivamente. A faixa
linear do método estendeu-se até 200 ug mL-1 e os
parâmetros de precisão e
robustez foram bastante satisfatórios. O método foi
aplicado na análise de uma
simulação de vacina contra a febre amarela e na análise de
medicamentos
comerciais com um percentual de recuperação entre 98,2 e
105,2 %. A
metodologia desenvolvida para a canamicina, que também não
apresentou fluorescência natural, baseou-se na reação de
oxirredução deste composto com o
Ce (IV) produzindo o Ce (III), que é uma espécie
fortemente fluorescente
(255/360 nm). As intensidades dos sinais fluorescentes
medidos no par
excitação/emissão do Ce (III) foram diretamente
proporcionais às concentrações
de canamicina. As condições para a realização da reação
foram estudadas,
avaliando a quantidade de Ce (IV), a concentração e tipo
de ácido usado no meio
reacional e o tempo e temperatura de aquecimento. A ampla
faixa linear (até 1000
ug mL-1) foi obtida, com limites de detecção e
quantificação de 1,22 ug mL-1 e
4,08 ug mL-1, respectivamente. O percentual de recuperação
obtido na análise da
vacina diluída foi de 109,8 % e em amostra diluída de
urina enriquecida com o
analito foi de 103,4 %. / [en] The antibiotics erythromycin and kanamycin, members of the
macrolide and
aminoglycoside classes respectively, have their importance
as preservative agents
for the preparation process and during the using of the
yellow fever vaccine, five
doses presentation, produced in Technology on
Immunobiologicals Institute, Bio-
Manguinhos, FIOCRUZ, RJ. In this work two new approaches
for the
spectrofluorimetric determination of these antibiotics are
presented, taking into
consideration their selectivity performance for this
specific matrix (vaccine). A
preliminary study was performed to evaluate the
luminescent behavior
(phosphorescence and fluorescence) of these substances in
different experimental
conditions aiming to find the best ones that would lead to
the development of the
analytical methods. For erythromycin, which does not
present native
luminescence, a photochemical derivatization was employed
using analite
solutions prepared in sulfuric acid. As a result, a photo-
product was obtained,
which presented fluorescence at 412/465 nm. The
experimental conditions were
optimized aiming the maximization of the fluorescent
signal. In this case, the
studied parameters were the UV irradiation time, the type
and concentration of the
acid utilized, and the time and temperature used for the
heating step. The method
was partially validated, indicating limits of detection
and quantification of
0.25 ug mL-1 and 0.85 ug mL-1, respectively. The linear
dynamic range of the
method extended up to 200 ug mL-1 and the parameters
related to precision and
robustness were very satisfactory. The method was applied
in the analysis of a
simulated yellow fever vaccine and in commercial
pharmaceutical formulations.
Recovery percent between 98.2 and 105.2 % were achieved.
The methodology
developed for kanamycin, which also do not presented
natural fluorescence, was
based on the oxirreduction reaction of this compound with
Ce (IV), producing Ce
(III), a strongly fluorescent species (255/360 nm). The
fluorescence intensities, measured in the
excitation/emission pair of Ce (III), was directly
proportional to
the kanamycin concentration. The reaction conditions were
studied by the
evaluation of the amount of Ce (IV), the type and
concentration of the acid
utilized in reactional medium and heating time and
temperature. Large linear
range (up to 1000 ug mL-1) was obtained, with detection
and quantification limits
of 1.22 ug mL-1 and 4.08 ug mL-1, respectively. The
recovery percent obtained in
the analysis of a diluted vaccine was 109.8 % while the
recovery achieved for
diluted spiked urine was 103.4 %.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:puc-rio.br/oai:MAXWELL.puc-rio.br:7620 |
| Date | 27 December 2005 |
| Creators | VIRGINIA DE LOURDES MENDES FINETE |
| Contributors | RICARDO QUEIROZ AUCELIO |
| Publisher | MAXWELL |
| Source Sets | PUC Rio |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | TEXTO |
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