Akut hjärtinfarkt är globalt sett en vanlig dödsorsak. Hjärtinfarkter behöver inte ge tydliga symptom och dödsorsaken kan därmed vara okänd fram till en klinisk obduktion och att histopatolgiska studier av hjärtmuskelvävnad genomförs. Fosforwolframsyra-hematoxylin (PTAH) är en färgningsmetod som kan användas vid visualisering av hjärtinfarkt genom att färga myokardceller, fibrin, kontraktionsband och cellkärnor blå medan kollagen färgas rosa till rödbrunt. Syftet med examensarbetet var att optimera PTAH-färgningsprotokoll för att underlätta diagnosticering av hjärtinfarkt. Tre olika färgningsprotokoll, två med PTAH med Mallory Bleach (#1 och #2) och ett med PTAH med refixering i Bouins lösning (#3), jämfördes vid inkubering över natt i rumstemperatur samt 3-4 h i värmeskåp vid 56 ºC. Vävnader som färgades in var från paraffininbäddade klossar vilka tillhörde utsvarade fall med konstaterad hjärtinfarkt. Dessa snittades och värmdes fast på oladdade samt laddade objektglas. Efter färgning graderades infärgning efter kategorierna vävnadsdifferentiering och cellkomponenter med en poängskala från 0, ej bedömbar, till 3, optimal. Det protokoll med högst poäng optimerades för att hitta bästa inkuberingstid i PTAH-lösning, därefter implementerades protokollet genom att bekräfta korrekt infärgning vid upprepade infärgningar av hjärtmuskelvävnad. Protokoll #3 visade på högst poäng efter infärgning vid jämförelsen med protokoll #1 och #2 och under optimering framgick inkubering under 4 h i värmeskåp vid 56 ºC som mest gynnsam, då denna inkuberingstid även visade på mindre känslighet vid dehydrering. Slutsatsen blev att PTAH-färgning efter protokoll #3 med refixering i Bouins lösning med 4 h i värmeskåp gav bäst resultat, men färgnyansen varierar med tid mellan dödsfallet och obduktionen. / Acute myocardial infarction (MI) is a common cause of death globally. MI without symptoms or with atypical symptoms is usually first detected at clinical autopsy with histological analyses of the myocardium. Phosphtungstic acid haematoxylin (PTAH) is a method to visualize MI by staining myocytes, fibrin, contraction bands and nuclei blue while collagen stains reddish brown. The aim of this degree project is to optimize PTAH staining protocol for MI diagnosis. Three different staining protocols, two protocols with PTAH staining and Mallory Bleach solution and one protocol with PTAH staining with refixation in Bouin’s solution (#1-3), where compared along with incubation overnight in room temperature and at different hours in heat (56 ºC). Paraffin embedded tissues from myocardium from different autopsy cases diagnosed with MI were cut before mounting and heating on non-charged as well as charged slides. After staining, results were evaluated using scores 0-3 for two parameters; differences in tissues and cell components. Highest evaluated protocol where optimized to find the ultimate incubation in PTAH staining solution. For implementations, additional myocardial tissues from other cases were stained to confirm repeated results. Protocol #3 was evaluated higher in comparison with #1-2 and optimized to 4 h incubation in PTAH-solution in heating with staining results less sensitive to dehydration. In conclusion, staining protocol #3 with 4 h heating was optimal, however, vulnerable to prolonged morgue storage time losing the insensitivity of colour.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:lnu-123196 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Persson, Jenny |
| Publisher | Linnéuniversitetet, Institutionen för kemi och biomedicin (KOB) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0108 seconds