Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / IntroduÃÃo: A mucosite induzida por antineoplÃsicos à um fator limitante na terapia anticÃncer. O trato gastrintestinal à vulnerÃvel por causa da alta proliferaÃÃo e frequÃncia de renovaÃÃo celular. Saccharomyces boulardii (SB) à uma levedura probiÃtica que à utilizada para proteger a microflora gastrintestinal do desequilÃbrio e de distÃrbios gastrintestinais associados. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com SB na resposta inflamatÃria e nas vias de sinalizaÃÃo celular (NFkB e MAPK) e nos receptores Toll-like 2 e 4 associados a proteÃna adaptadora (MyD88) no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. MÃtodos: Camundongos machos Swiss (25-30g) foram tratados com 5-FU (450mg/Kg, i.p.) ou com soluÃÃo salina (controle). O grupo SB recebeu durante 3 dias consecutivos somente o SB (1.109 UFC/Kg, gavagem) atà o dia do sacrifÃcio. O grupo 5-FU+SB recebeu SB por 3 dias consecutivos apÃs a administraÃÃo do 5-FU. No 4 dia apÃs o 5-FU ou 5-FU+SB, os animais foram sacrificados, amostras de jejuno e Ãleo foram retiradas e os parÃmetros gerais da mucosite foram avaliados (leucograma, perca de peso, diarreia, histologia e MPO). Utilizou-se tambÃm as cÃlulas Caco2 incubadas com 5-FU (1mM) e SB por 24h. Avaliou-se tambÃm a inflamaÃÃo e as vias de sinalizaÃÃo celular, para isso avaliamos a expressÃo de NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK), iNOS, citocinas prÃ-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), receptores toll-like 2 e 4 e, MyD88. Utilizou-se os mÃtodos de ELISA e ImunohistoquÃmica para as anÃlises em tecidos animais e, utilizamos as tÃcnicas de qPCR e de WB para as anÃlises celulares. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesÃo intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presenÃa das seguintes alteraÃÃes: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolizaÃÃo de cÃlulas, presenÃa de infiltrado de polimorfonucleares, aumento das concentraÃÃes de citocinas pro-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), aumento das concentraÃÃes de iNOS, alteraÃÃes das vias celulares NF-kB e MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK) e alteraÃÃo dos receptores Toll-like 2 e 4 e de MyD88. O tratamento com 5-FU+SB reduziu significativamente as lesÃes intestinais, com recuperaÃÃo dos vilos, recuperaÃÃo da profundidade das criptas, diminuiÃÃo do infiltrado neutrofÃlico e de iNOS, reduÃÃo da concentraÃÃo das citocinas pro-inflamatÃrias. Reduziu a alteraÃÃo causada pelo 5-FU nas vias celulares NF-kB e MAPK e nas expressÃes de receptores TLR2 e TLR4 e de MyD88. ConclusÃo: O SB reverte a mucosite intestinal causada pelo 5-FU, com a participaÃÃo de TNF-α, IL-1β, CXCL-1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ e iNOS. O SB parece inibir as vias NF-kB e MAPK. Nossos achados, em parte, poderiam explicar os sintomas persistentes da mucosite intestinal nos pacientes sob o tratamento com 5-FU, alÃm de contribuir para o entendimento dessa patogÃnese, auxiliando na descoberta de novas abordagens terapÃuticas com o uso de Saccharomyces boulardii. / IntroduÃÃo: A mucosite induzida por antineoplÃsicos à um fator limitante na terapia anticÃncer. O trato gastrintestinal à vulnerÃvel por causa da alta proliferaÃÃo e frequÃncia de renovaÃÃo celular. Saccharomyces boulardii (SB) à uma levedura probiÃtica que à utilizada para proteger a microflora gastrintestinal do desequilÃbrio e de distÃrbios gastrintestinais associados. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com SB na resposta inflamatÃria e nas vias de sinalizaÃÃo celular (NFkB e MAPK) e nos receptores Toll-like 2 e 4 associados a proteÃna adaptadora (MyD88) no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. MÃtodos: Camundongos machos Swiss (25-30g) foram tratados com 5-FU (450mg/Kg, i.p.) ou com soluÃÃo salina (controle). O grupo SB recebeu durante 3 dias consecutivos somente o SB (1.109 UFC/Kg, gavagem) atà o dia do sacrifÃcio. O grupo 5-FU+SB recebeu SB por 3 dias consecutivos apÃs a administraÃÃo do 5-FU. No 4 dia apÃs o 5-FU ou 5-FU+SB, os animais foram sacrificados, amostras de jejuno e Ãleo foram retiradas e os parÃmetros gerais da mucosite foram avaliados (leucograma, perca de peso, diarreia, histologia e MPO). Utilizou-se tambÃm as cÃlulas Caco2 incubadas com 5-FU (1mM) e SB por 24h. Avaliou-se tambÃm a inflamaÃÃo e as vias de sinalizaÃÃo celular, para isso avaliamos a expressÃo de NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK), iNOS, citocinas prÃ-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), receptores toll-like 2 e 4 e, MyD88. Utilizou-se os mÃtodos de ELISA e ImunohistoquÃmica para as anÃlises em tecidos animais e, utilizamos as tÃcnicas de qPCR e de WB para as anÃlises celulares. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesÃo intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presenÃa das seguintes alteraÃÃes: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolizaÃÃo de cÃlulas, presenÃa de infiltrado de polimorfonucleares, aumento das concentraÃÃes de citocinas pro-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), aumento das concentraÃÃes de iNOS, alteraÃÃes das vias celulares NF-kB e MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK) e alteraÃÃo dos receptores Toll-like 2 e 4 e de MyD88. O tratamento com 5-FU+SB reduziu significativamente as lesÃes intestinais, com recuperaÃÃo dos vilos, recuperaÃÃo da profundidade das criptas, diminuiÃÃo do infiltrado neutrofÃlico e de iNOS, reduÃÃo da concentraÃÃo das citocinas pro-inflamatÃrias. Reduziu a alteraÃÃo causada pelo 5-FU nas vias celulares NF-kB e MAPK e nas expressÃes de receptores TLR2 e TLR4 e de MyD88. ConclusÃo: O SB reverte a mucosite intestinal causada pelo 5-FU, com a participaÃÃo de TNF-α, IL-1β, CXCL-1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ e iNOS. O SB parece inibir as vias NF-kB e MAPK. Nossos achados, em parte, poderiam explicar os sintomas persistentes da mucosite intestinal nos pacientes sob o tratamento com 5-FU, alÃm de contribuir para o entendimento dessa patogÃnese, auxiliando na descoberta de novas abordagens terapÃuticas com o uso de Saccharomyces boulardii. / IntroduÃÃo: A mucosite induzida por antineoplÃsicos à um fator limitante na terapia anticÃncer. O trato gastrintestinal à vulnerÃvel por causa da alta proliferaÃÃo e frequÃncia de renovaÃÃo celular. Saccharomyces boulardii (SB) à uma levedura probiÃtica que à utilizada para proteger a microflora gastrintestinal do desequilÃbrio e de distÃrbios gastrintestinais associados. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com SB na resposta inflamatÃria e nas vias de sinalizaÃÃo celular (NFkB e MAPK) e nos receptores Toll-like 2 e 4 associados a proteÃna adaptadora (MyD88) no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. MÃtodos: Camundongos machos Swiss (25-30g) foram tratados com 5-FU (450mg/Kg, i.p.) ou com soluÃÃo salina (controle). O grupo SB recebeu durante 3 dias consecutivos somente o SB (1.109 UFC/Kg, gavagem) atà o dia do sacrifÃcio. O grupo 5-FU+SB recebeu SB por 3 dias consecutivos apÃs a administraÃÃo do 5-FU. No 4 dia apÃs o 5-FU ou 5-FU+SB, os animais foram sacrificados, amostras de jejuno e Ãleo foram retiradas e os parÃmetros gerais da mucosite foram avaliados (leucograma, perca de peso, diarreia, histologia e MPO). Utilizou-se tambÃm as cÃlulas Caco2 incubadas com 5-FU (1mM) e SB por 24h. Avaliou-se tambÃm a inflamaÃÃo e as vias de sinalizaÃÃo celular, para isso avaliamos a expressÃo de NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK), iNOS, citocinas prÃ-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), receptores toll-like 2 e 4 e, MyD88. Utilizou-se os mÃtodos de ELISA e ImunohistoquÃmica para as anÃlises em tecidos animais e, utilizamos as tÃcnicas de qPCR e de WB para as anÃlises celulares. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesÃo intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presenÃa das seguintes alteraÃÃes: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolizaÃÃo de cÃlulas, presenÃa de infiltrado de polimorfonucleares, aumento das concentraÃÃes de citocinas pro-inflamatÃrias (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), aumento das concentraÃÃes de iNOS, alteraÃÃes das vias celulares NF-kB e MAPK (p-ERK1/2, p-p38, p-JNK) e alteraÃÃo dos receptores Toll-like 2 e 4 e de MyD88. O tratamento com 5-FU+SB reduziu significativamente as lesÃes intestinais, com recuperaÃÃo dos vilos, recuperaÃÃo da profundidade das criptas, diminuiÃÃo do infiltrado neutrofÃlico e de iNOS, reduÃÃo da concentraÃÃo das citocinas pro-inflamatÃrias. Reduziu a alteraÃÃo causada pelo 5-FU nas vias celulares NF-kB e MAPK e nas expressÃes de receptores TLR2 e TLR4 e de MyD88. ConclusÃo: O SB reverte a mucosite intestinal causada pelo 5-FU, com a participaÃÃo de TNF-α, IL-1β, CXCL-1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ e iNOS. O SB parece inibir as vias NF-kB e MAPK. Nossos achados, em parte, poderiam explicar os sintomas persistentes da mucosite intestinal nos pacientes sob o tratamento com 5-FU, alÃm de contribuir para o entendimento dessa patogÃnese, auxiliando na descoberta de novas abordagens terapÃuticas com o uso de Saccharomyces boulardii. / Introduction: Intestinal mucositis is a frequent side-effect associated to 5-fluorouracil (5-FU) clinical use and results in inflammatory events. It is characterized by epithelial ulcerations in the mucosa and clinical manifestations of abdominal pain, nauseas and diarrhea. Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast which has been shown to protect the gastrointestinal microflora from disequilibrium and from associated gastrointestinal disorders. Aim: To evaluate the effect of treatment with SB in the inflammatory response and in cellular signaling pathways (MAPK and NFkB) and Toll-like receptors 2 and 4, and associated adapter protein (MyD88) in the course of experimental intestinal mucositis induced by 5-FU. Methods: Male Swiss mice (25-30g) were treated with 5-FU (450 mg / kg, i.p.) or saline (control). The SB group received for 3 consecutive days only the SB (1,109 CFU / kg, gavage) until the day of sacrifice. 5-FU group received 5-FU+SB for 3 consecutive days after administration of 5-FU. On the 4th day after 5-FU or 5-FU + SB, the animals were sacrificed, samples of jejunum and ileum were removed and the general parameters of mucositis were evaluated (WBC, loss of weight, diarrhea, histology and MPO). It also used the Caco2 cells treated with 5-FU (1mM) and SB for 24h. We also evaluated the inflammation and cellular signaling pathways, for that evaluate the expression of NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK), iNOS, inflammatory proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. Immunohistochemistry and ELISA methods were used for the analysis in animal tissues and used qPCR techniques and WB for cell analysis. Results: Treatment with 5-FU was able to induce intestinal injury with a significant impairment of epithelial barrier function in the presence of the following changes: severe shortening of the villus, crypts of partial necrosis, vacuolization of cells, infiltration and mono polymorphonuclear, increased concentration of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), increased expression of iNOS, changed c expressions of NF-kB and MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK) cellular pathways and changed the toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. However, treatment with SB significantly reduced intestinal lesions, recovery of the villi, the crypt depth recovery, decreased neutrophil infiltration and iNOS, reducing the concentration of pro-inflammatory cytokines. Reversed the changes caused by 5-FU in cellular pathways NF-kB and MAPK and expressions of TLR2 and TLR4 receptors and MyD88. / Introduction: Intestinal mucositis is a frequent side-effect associated to 5-fluorouracil (5-FU) clinical use and results in inflammatory events. It is characterized by epithelial ulcerations in the mucosa and clinical manifestations of abdominal pain, nauseas and diarrhea. Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast which has been shown to protect the gastrointestinal microflora from disequilibrium and from associated gastrointestinal disorders. Aim: To evaluate the effect of treatment with SB in the inflammatory response and in cellular signaling pathways (MAPK and NFkB) and Toll-like receptors 2 and 4, and associated adapter protein (MyD88) in the course of experimental intestinal mucositis induced by 5-FU. Methods: Male Swiss mice (25-30g) were treated with 5-FU (450 mg / kg, i.p.) or saline (control). The SB group received for 3 consecutive days only the SB (1,109 CFU / kg, gavage) until the day of sacrifice. 5-FU group received 5-FU+SB for 3 consecutive days after administration of 5-FU. On the 4th day after 5-FU or 5-FU + SB, the animals were sacrificed, samples of jejunum and ileum were removed and the general parameters of mucositis were evaluated (WBC, loss of weight, diarrhea, histology and MPO). It also used the Caco2 cells treated with 5-FU (1mM) and SB for 24h. We also evaluated the inflammation and cellular signaling pathways, for that evaluate the expression of NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK), iNOS, inflammatory proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. Immunohistochemistry and ELISA methods were used for the analysis in animal tissues and used qPCR techniques and WB for cell analysis. Results: Treatment with 5-FU was able to induce intestinal injury with a significant impairment of epithelial barrier function in the presence of the following changes: severe shortening of the villus, crypts of partial necrosis, vacuolization of cells, infiltration and mono polymorphonuclear, increased concentration of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), increased expression of iNOS, changed c expressions of NF-kB and MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK) cellular pathways and changed the toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. However, treatment with SB significantly reduced intestinal lesions, recovery of the villi, the crypt depth recovery, decreased neutrophil infiltration and iNOS, reducing the concentration of pro-inflammatory cytokines. Reversed the changes caused by 5-FU in cellular pathways NF-kB and MAPK and expressions of TLR2 and TLR4 receptors and MyD88. / Introduction: Intestinal mucositis is a frequent side-effect associated to 5-fluorouracil (5-FU) clinical use and results in inflammatory events. It is characterized by epithelial ulcerations in the mucosa and clinical manifestations of abdominal pain, nauseas and diarrhea. Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast which has been shown to protect the gastrointestinal microflora from disequilibrium and from associated gastrointestinal disorders. Aim: To evaluate the effect of treatment with SB in the inflammatory response and in cellular signaling pathways (MAPK and NFkB) and Toll-like receptors 2 and 4, and associated adapter protein (MyD88) in the course of experimental intestinal mucositis induced by 5-FU. Methods: Male Swiss mice (25-30g) were treated with 5-FU (450 mg / kg, i.p.) or saline (control). The SB group received for 3 consecutive days only the SB (1,109 CFU / kg, gavage) until the day of sacrifice. 5-FU group received 5-FU+SB for 3 consecutive days after administration of 5-FU. On the 4th day after 5-FU or 5-FU + SB, the animals were sacrificed, samples of jejunum and ileum were removed and the general parameters of mucositis were evaluated (WBC, loss of weight, diarrhea, histology and MPO). It also used the Caco2 cells treated with 5-FU (1mM) and SB for 24h. We also evaluated the inflammation and cellular signaling pathways, for that evaluate the expression of NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK), iNOS, inflammatory proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. Immunohistochemistry and ELISA methods were used for the analysis in animal tissues and used qPCR techniques and WB for cell analysis. Results: Treatment with 5-FU was able to induce intestinal injury with a significant impairment of epithelial barrier function in the presence of the following changes: severe shortening of the villus, crypts of partial necrosis, vacuolization of cells, infiltration and mono polymorphonuclear, increased concentration of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), increased expression of iNOS, changed c expressions of NF-kB and MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK) cellular pathways and changed the toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. However, treatment with SB significantly reduced intestinal lesions, recovery of the villi, the crypt depth recovery, decreased neutrophil infiltration and iNOS, reducing the concentration of pro-inflammatory cytokines. Reversed the changes caused by 5-FU in cellular pathways NF-kB and MAPK and expressions of TLR2 and TLR4 receptors and MyD88.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:10873 |
| Date | 04 March 2016 |
| Creators | Priscilla Fernanda Campos Justino |
| Contributors | Pedro Marcos Gomes Soares, Marcellus Henrique Loiola Ponte de Souza, Andrà Luiz dos Reis Barbosa, Marcos FÃbio Gadelha Rocha, Marcelo de Carvalho Filgueiras |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0035 seconds