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Determinação de carboidratos estruturais em forrageiras tropicais por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-UV)

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Previous issue date: 2009-08-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A qualidade nutricional da forragem pode ser identificada através da análise dos carboidratos estruturais presentes nas espécies. Os carboidratos estruturais estão distribuídos nas plantas entre a celulose, composta de glicose, hemicelulose que tem na sua estrutura a arabinose e xilose, e a pectina que é formada por arabinose entre outros compostos. Estas frações da parede celular é que chegam ao intestino dos ruminantes e são absorvidas em sua plenitude, sendo de suma importância o conhecimento da concentração presente para melhorar o desempenho dos bovinos em regime de pastejo. O presente trabalho propõe uma metodologia de extração com ultra-som e chapa de aquecimento, separação e quantificação por HPLC de glicose, arabinose e xilose em forrageiras tropicais. A metodologia de análise foi desenvolvida em um cromatógrafo líquido de alta eficiência com detecção na região do UV e coluna de fase reversa C-18. A composição e pH da fase móvel, comprimento de onda na detecção foram parâmetros estudados na otimização do método, no qual a melhor condição foi obtida com eluição isocrática usando como fase móvel acetonitrila/solução aquosa H3PO4 pH 2,15 (1:99). Para diminuir o tempo e o custo da etapa de tratamento das amostras foi estudada a extração utilizando chapa de aquecimento, que se mostrou um processo mais rápido, reprodutível e eficiente se comparado a extração utilizando a autoclave. Os parâmetros de derivatização pré-coluna usando o ácido p-aminobenzóico foram estudados, sendo a melhor condição observada com a concentração do ácido de 0,12 mol.L-1, em um tempo de reação de 10 minutos em uma temperatura de 80° C. Foram realizados testes para avaliação do método, aplicando padronização externa, dentre eles avaliação da resposta linear, limites de detecção e quantificação, repetitividade, seletividade e recuperação. A metodologia implementada foi aplicada a análise de 68 amostras de 3 espécies de forrageiras, folha e caule: Pennisetum purpureum cv. anão e pioneiro; Brachiaria brizantha, Brachiaria decumbens, Panicum maximum cv. tânzania e massai. As faixas de concentrações encontradas expressas em mg.g-1 de matéria seca foram de 31,98 a 188,38 para glicose, 6,28 a 30,95 para arabinose e 42,66 a 176,04 para a xilose. / The nutritional quality of forage can be identified through structural analysis of carbohydrates present in the species. The structural carbohydrates in plants are distributed between the cellulose, composed of glucose, hemicellulose that has in its structure arabinose and xylose, and pectin which is composed of arabinose and others compounds. These fractions of the cell wall is that wounds the intestines of ruminant animals and are absorbed in its fullness. It is extreme importance the knowledge of this concentration to improve the performance of cattle on a pasture. This paper proposes a method for extraction with ultrasound and the heating plate, HPLC separation and quantification of glucose, arabinose and xylose in tropical forages. The method of analysis was developed in a high performance liquid chromatography with UV detection and reverse-phase C-18. The composition and pH of the mobile phase, wavelength in the detection parameters were studied in the optimization of the method. The best condition was achieved with isocratic elution using as mobile phase acetonitrile / aqueous H3PO4 pH 2.15 (1:99). In order to reduce the time and cost of the treatment and extraction of samples, this process was studied using the heating plate, which showed a more rapid, reproducible and efficient compared than extraction using the autoclave. The parameters of precolumn derivatization using p-aminobenzoic acid were studied. The best condition seen with the concentration of acid of 0.12 mol.L-1, a reaction time of 10 minutes at a temperature of 80 ° C. Tests were performed to evaluate the method, using external standardization, including evaluation of linear response, detection and quantification limits, repeatability, selectivity and recovery. The methodology implemented was applied to analysis of 68 samples (3 species of forage), leaf and stem: Pennisetum purpureum Schum cv. anão e Pennisetum purpureum Schum cv. pioneiro, Brachiaria brizantha, Brachiaria decumbens, Panicum maximum cv. Tanzania and Panicum maximum cv. Masai. The concentration ranges found expressed in mg.g-1 dry weight were: 31.98 to 188.38 for glucose, 6.28 to 30.95 for arabinose and 42.66 to 176.04 for xylose.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/4309
Date21 August 2009
CreatorsDornellas, Rafael Machado
ContributorsMatos, Maria Auxiliadora Costa, Carneiro, Jaílton da Costa, Martelli, Patrícia Benedini, Lowinsohn, Denise
PublisherUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Programa de Pós-graduação em Química, UFJF, Brasil, ICE – Instituto de Ciências Exatas
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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