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Previous issue date: 2008-07-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The determination of plant hormones can be an excellent tool for to study the plant
development. Today, the complexity of methods, equipment and reagents of high cost limit
the use with practice of routine. Some advantages of methods immunoassay can exceed those
limitations, showing a potential of practical use in determination of plant hormones. The test
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) is utilized in detection of molecules with low
molecular weight. However, the ELISA requires specific antibodies against molecules of
interest, in the case, plant hormones. Today in the market there is not available antibodies for
the determination of hormonal molecules. Faced with that, proposed be produced and
characterize antibodies against molecules of AIA, 2ip and zeatin and subsequently, for use the
detection those molecules. For that, the hormonal molecules were conjugated with protein
(BSA) for subsequent immunization of chicken or rabbits. From the serum of rabbits or yolks
eggs the antibodies were purified and characterized through the test of precipitation of double
diffusion, SDS-PAGE and test ELISA. The antibodies that presented better results were
utilized in detection of plant hormones molecules in samples of plantlets in vitro of gerbera.
The test of precipitation of double diffusion revealed that the antibodies productized were
capable of will detect the molecule in study. Through in the SDS-PAGE was verified that the
antibodies obtained in eggs yolks of chicken presented superior purity than them obtained in
serum of rabbits. From the results of the test ELISA, observed itself that the antibodies
against AIA did not present potential of practical use. The detection of plant hormones in
samples of tissue stayed restricted to 2ip and zeatin. The detection of those two molecules in
crude extract, obtained from plantlets in vitro of gerbera, revealed that the level endogenous
of zeatin was higher of level 2ip. Plantlets with six weeks after multiplication presented
higher level of zeatin than plantlets with one week after multiplication. For the 2ip, that
difference was not evident. The use of antibodies obtained in eggs yolks of chicken permitted
the determination of zeatin and 2ip in samples plant utilizing the test ELISA. / A determina??o do n?vel hormonal end?geno pode ser uma excelente ferramenta para estudar
o desenvolvimento vegetal. Atualmente, fica limitada devido a complexidade das
metodologias adotadas, uma vez que demandam equipamentos e reagentes de alto custo e
ainda apresentam baixo rendimento. Por outro lado, os ensaios imunoenzim?ticos possuem
algumas vantagens que superam essas limita??es, demonstrando um potencial de uso pr?tico
na dosagem de horm?nios vegetais. Entre os ensaios imunoenzim?ticos, destaca-se o teste
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), o qual vem sendo utilizado na detec??o de
mol?culas com baixo peso molecular. No entanto, o teste ELISA exige anticorpos espec?ficos
e que sejam capazes de reconhecer as mol?culas de interesse, no caso os horm?nios vegetais.
Hoje no mercado n?o h? anticorpos dispon?veis para a determina??o das mol?culas
hormonais. Diante disso, prop?s-se produzir e caracterizar anticorpos contra mol?culas de
AIA, 2ip e zeatina e posteriormente, us?-los na detec??o dessas mol?culas. Para isso, as
mol?culas hormonais foram conjugadas com prote?na (BSA) para posterior imuniza??o de
galinhas poedeiras ou coelhos. A partir do soro de coelhos ou de gemas de ovos de galinhas
os anticorpos foram purificados e caracterizados atrav?s do teste de imunodifus?o, SDSPAGE
e teste ELISA. Os anticorpos que apresentaram melhores resultados foram utilizados
na detec??o de mol?culas hormonais em amostras de tecidos de pl?ntulas mantidas in vitro. O
teste de imunodifus?o revelou que os anticorpos obtidos foram capazes de detectarem a
mol?cula em estudo. Atrav?s do SDS-PAGE verificou-se que os anticorpos obtidos em gemas
de ovos de galinhas apresentaram maior pureza que os obtidos em coelhos, sugerindo que os
mesmos possuem maior potencial de uso pr?tico. A partir dos resultados do teste ELISA,
observou-se que os anticorpos contra AIA n?o apresentaram potencial de uso pr?tico na
determina??o dessa mol?cula em amostras vegetais. Sendo assim, a detec??o de mol?culas
hormonais em amostras de tecidos vegetais ficou restrita a 2ip e a zeatina. A detec??o dessas
duas mol?culas em extrato bruto, obtidos a partir de pl?ntulas de g?rbera mantidas in vitro,
revelou que o n?vel end?geno de zeatina foi superior ao n?vel de 2ip. Pl?ntulas com seis
semanas ap?s a repicagem apresentaram maior n?vel de zeatina do que pl?ntulas rec?m
repicadas, enquanto para o 2ip, essa diferen?a n?o foi evidente. O uso de anticorpos obtidos
em gemas de ovos de galinhas permitiu a detec??o e quantifica??o de zeatina e 2ip em
amostras vegetais utilizando o teste ELISA.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/557 |
| Date | 25 July 2008 |
| Creators | Sousa, Cleiton Mateus |
| Contributors | Miranda, Ricardo Motta, Freire, Ronald Bastos |
| Publisher | Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Curso de P?s-Gradua??o em Fitotecnia, UFRRJ, Brasil, Produ??o Vegetal |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ, instname:Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, instacron:UFRRJ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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