Orientador: Maria de Fatima Sonati / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T04:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2007 / Resumo: A expressão dos genes do cluster da globina a em humanos é regulada pelo a-MRE ( a-Major Regulatory Element), um elemento localizado 40 kb à montante do respectivo cluster na região telomérica do braço curto do cromossomo 16. O a-MRE é geneticamente polimórfico e seis diferentes haplótipos, nomeados de A a F, foram determinados em alguns grupos populacionais da África, Europa e Ásia e em indivíduos pertencentes a duas populações indígenas brasileiras. As substituições de base que resultaram nestes haplótipos estão localizadas entre sítios de ligação para fatores nucleares ou em um sítio não ocupado in vivo, exceto no caso do haplótipo D, em que o polimorfismo altera a seqüência de um dos sítios ocupado in vivo pelo fator NF-E2. Não há, de nosso conhecimento, nenhum estudo experimental feito para avaliar se essa variabilidade pode influenciar a expressão gênica. Assim, no presente trabalho foi analisada e comparada a expressão do gene repórter da luciferase em células K562 transientemente transfectadas com construções que tiveram como enhancers os diferentes haplótipos do a-MRE, além de 3 dos polimorfismos isoladamente (+130, +199 e +209). Os resultados revelaram redução da expressão do gene da luciferase com todas as construções em relação à do haplótipo selvagem A: os haplótipos B e C corresponderam a 19% do grau de expressão do haplótipo A, o D a 21%, o E a 15%, o F a 3%, o polimorfismo +130 a 24%, o +199 a 32% e o +209 a 3%. Em seu conjunto, eles demonstram que os polimorfismos responsáveis pelos diferentes haplótipos do a-MRE, em sua maioria situados nas seqüências flanqueadoras dos sítios de ligação para proteínas regulatórias, reduzem a expressão gênica in vitro / Abstract: The expression of human a-like globin genes is regulated by the a-MRE (a-Major Regulatory Element), an element located 40 kb upstream of the a cluster in the short arm of chromosome 16. The a-MRE is genetically polymorphic and six different haplotypes, named A to F, have been identified in some population groups from Europe, Africa and Asia and in native Indians from two Brazilian Indian tribes. The base substitutions that resulted in these haplotypes are located between binding sites for nuclear factors or in a site that is considered not to be active in vivo, with the exception of haplotype D, in which the polymorphism changes the first binding site for the NF-E2 factor occupied in vivo. To our knowledge, there are no experimental studies evaluating whether this variability may influence gene expression. Thus, the present work analyzed and compared the expression of the luciferase reporter gene in K562 cells transiently transfected with constructs that have, as enhancers, the different a-MRE haplotypes, besides three isolated polymorphisms (+130, +199 and +209). The results demonstrated a reduction in luciferase gene expression with all the constructs compared with the wild type a-MRE (A haplotype): the B and C haplotypes corresponded to 19% of the A haplotype expression, the D to 21%, the E to 15%, the F to 3%, the polymorphism +130 to 24%, the +199 to 32% and the +209 to 3%. They demonstrate that the polymorphisms responsible for the a-MRE haplotypes, most located in the flanking sequences of the regulatory protein binding sites, decrease in vitro gene expression / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/310876 |
| Date | 24 August 2007 |
| Creators | Ribeiro, Daniela Maria |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Sonati, Maria de Fátima, 1958-, Salzano, Francisco Mauro, Silva, Márcio José da, Melo, Mônica Barbosa de, Mello, Maricilda Palandi de |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 85f. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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