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Previous issue date: 2002 / A lectina de folhas de Bauhinia monandra (BmoLL) foi previamente purificada por
fracionamento com sulfato de amônio (F 0-60%) seguido por cromatografia de afinidade
com gel de Guar. Para o estudo da BmoLL foi desenvolvido um anticorpo policlonal em
coelho contra esta lectina; anti-BmoLL IgG foi purificada em coluna de Sepharose-Proteína
A. Em imunodifusão, anti-BmoLL IgG apresentou reações cruzadas com lectinas de
Bauhinia purpurea e Ulex europaeus I. Lectinas de Bandeiraea simplicilofia II e Triticum
vulgaris reagiram inespecificamente com substâncias presentes no antissoro mas ausentes
na preparação obtida de IgG. Precipitações de anti-BmoLL IgG com extratos de outros
tecidos de B. monandra, revelaram outras formas moleculares da lectina. Anti-BmoLL IgG
foi conjugada com peroxidase e aplicada em ELISA, confirmando os resultados de
imunodifusão. Para a sua aplicação no biossensor piezoelétrico, o rendimento do método de
imobilização foi testado imobilizando anti-BmoLL IgG em placas de ouro (4 x 4 x 0.5
mm3) em quantidades de 0, 110 e 220 mg em 100 ml utilizando dextrana tratado com
bromocianeto. As concentrações de IgG não imobilizada foram medidas pela quantificação
de proteína após a imobilização e lavagens com PBS. As quantidades de 110 e 220 mg de
anti-BmoLL IgG apresentaram respectivamente, rendimentos de imobilização de 46% e
33%. Anti-BmoLL IgG (110 mg/ml) foi imobilizada na superfície de ouro de Microbalança
de Cristal de Quartzo (do inglês Quartz Crystal Microbalance, QCM). Na execução de
ensaio de piezoelétrico, a QCM foi incubada com solução de BmoLL (91 mg/ml) seguido
de uma redução de freqüência com 5 kHz, mostrando um grande reconhecimento da lectina
pela IgG imobilizada. No potenciometro e no medidor de turbidez, anti-BmoLL IgG não
provocou nenhuma alteração na ligação de galactose por BmoLL, indicando que a IgG
purificada não tem afinidade pelos sítios de ligação de carboidrato de BmoLL
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1743 |
| Date | January 2002 |
| Creators | Johannes Haver, Nicolaas |
| Contributors | Cassandra Breitenbach Barroso Coelho, Luana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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