Hepatitis-C Virus (HCV) remains the leading cause of liver transplant in the US and the UK, and the World Health Organization (WHO) estimates that 71 million people are infected worldwide. A vaccine would drastically impact the healthcare-associated burdens that HCV causes globally. The objective of this master’s thesis project is to produce human antibody (IgG) against HCV. This project will focus on the monoclonal antibodies (mAbs) HEPC3, AR3C, HEPC74, and HCV1. These four antibodies have been isolated from patients who have successfully cleared the infection, and their sequences and structures are available in the public domain. These four antibodies have also shown to bind to E2, a glycoprotein on the surface HCV that is crucial for viral binding and entry. This interaction of the mABs with E2 has been implicated in viral neutralization, making them promising choices for this study. Overall, 3 out of 4 mAbs were successfully cloned and produced. The unsuccessful antibody, HEPC74, was discovered to have failed due to an error in the plasmid sequence. Just as the western blot to confirm secretion was ready to be run, the laboratory closed due the Covid-19 outbreak. Therefore, the data can officially declare a ¾ mAb production success, however it is safe to assume that the alternative clone for HEPC74 was also a success due to a perfect sequence match. Since the primary objective of this project was to successfully clone and produce these four antibodies, then this study is considered an overall success. Lastly, this study examined how the same protocol could be applied the SARS-CoV-2 outbreak, by the cloning and production of anti-RBD IgG and testing them for viral neutralization. / Hepatit-C (HCV) är fortsatt den enskilt största orsaken till levertransplantationer med uppskattningsvis 71 miljoner infekterade globalt sett, enligt världshälsoorganisationen (WHO).Ett vaccin mot HCV skulle drastiskt minska trycket på global hälso- och sjukvård. Syftet med detta projekt är att producera antikroppar (igG) mot HCV. Projektet fokuserar på HEPC3, AR3C, HEPC74 och HCV1 som är monoklonala antikroppar (mAbs). Dessa antikroppsvarianter har isolerats från patienter som tillfrisknat från infektion. Både DNA-sekvenser och strukturer av antikropparna finns offentligt tillgängliga. Dessa fyra antikroppar har också visats kunna binda till E2 som är ett membranbundet glykoprotein hos HCV som är centralt för viral adhesion och fusion. Interaktionen mellan dessa mAbs och E2 har visat sig neutralisera virulens, vilket gör dem till lovande kandidater för denna studie. Tre av fyra mAbs kunde klonas och produceras framgångsrikt. Försöket med HEPC74 misslyckades på grund av ett fel i plasmidsekvensen och just som western blot skulle genomföras för att bekräfta sekretion av en alternativ klon avslutades the praktiska arbetet med anledning av Covid-19 utbrottet. Resultaten visar entydigt att tre av fyra mAb producerades framgångsrikt. Det går dock att anta att det andra försöket med HEPC74 sannolikt också lyckades pga perfekt sekventiell matchning. Då det huvudsakliga syftet med projektet var att framgångsrikt klona och producera dessa fyra antikroppar så kan studien anses vara framgångsrik. Slutligen så undersöktes huruvida samma förfarande kunde appliceras mot SARS-CoV-2 genom kloning och produktion av anti-RBD IgG och tester av viral neutralisering.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-278578 |
| Date | January 2020 |
| Creators | García Mark, Megan Olga |
| Publisher | KTH, Skolan för kemi, bioteknologi och hälsa (CBH) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-CBH-GRU ; 2020:117 |
Page generated in 0.0023 seconds