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Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ocorrência de formas graves de esporotricose felina, aliada a lesões sem granulomas e ricas em estruturas leveduriformes, evidencia a suscetibilidade destes animais para a doença e enfatiza a importância do estudo da sua patogenia. O objetivo deste estudo foi descrever o processo inflamatório e a carga fúngica das lesões em diferentes apresentações clínicas, e sua relação com o perfil de leucócitos no sangue periférico de gatos com esporotricose por meio da técnica de citometria de fluxo (CF) e com a infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e/ou pelo Vírus da Leucemia Felina (FeLV). Gatos com lesões cutâneas com isolamento de Sporothrix sp. foram incluídos no estudo, separados nos grupos L1, L2 e L3 (lesões em um, dois e três ou mais locais, respectivamente) e submetidos a coleta de sangue e de fragmentos de lesão. O estado geral dos animais foi classificado como bom, regular ou ruim. Ao exame histopatológico, as lesões foram agrupadas de acordo com o processo inflamatório (granulomatoso ou inespecífico), grau de ativação de fagócitos predominantes nos granulomas (macrófagos ou células epitelióides), organização do granuloma (bem formado ou mal formado) e intensidade dos tipos celulares no infiltrado
A carga fúngica foi verificada pelas técnicas de impregnação pela prata de Grocott (IPG) e imuno-histoquímica (IHQ). A CF foi aplicada no sangue periférico, utilizando anticorpos monoclonais para os marcadores CD4, CD8, CD21, CD14 e granulócitos. Cento e um animais foram incluídos no estudo: 20 do grupo L1, 22 do grupo L2 e 59 do grupo L3. O processo inflamatório granulomatoso supurativo (PIGS) foi observado em 99 casos. A maioria das lesões, sobretudo no grupo L3, apresentavam granulomas mal formados (pvalor= 0,032) e com predomínio de macrófagos (p-valor=0,010). A IPG e a IHQ evidenciaram estruturas leveduriformes (EL) em 94 casos cada uma, sendo a concordância entre as duas observada em 92 casos. As duas técnicas associadas apresentaram sensibilidade de 98,0%. A carga fúngica de mais de 400 EL/ campo (400x) ocorreu em 48,5% dos casos com PIGS e foi predominante nos animais do grupo L3. Houve correlação entre granulomas mal formados e com predomínio de macrófagos e a carga fúngica superior a 100 EL/ campo (p-valor<0,01). A CF foi realizada em 33 casos de esporotricose e cinco animais não infectados (Grupo controle). O percentual de linfócitos T CD8+ foi maior nos animais dos grupos L2 e L3 (p-valor=0,01)
O maior percentual de células CD4+ esteve associado ao grupo L1 e ao estado geral bom (pvalor= 0,04 e 0,03, respectivamente). A expressão CD8low ocorreu em 20 animais com esporotricose, sendo predominante no grupo L3 (p-valor=0,01), e não ocorreu no grupo controle. Esta expressão foi associada a granulomas com predomínio de macrófagos (p-valor=0,01) e ocorreu em 76,2% dos casos com carga fúngica acima de 100 EL/campo. Três animais foram positivos para FIV, quatorze para FeLV e dois para os dois testes. Não houve correlação entre estes testes e os demais achados. Estes resultados sugerem associação entre a resposta bem organizada, menor carga fúngica e aumento de linfócitos CD4+ com o controle da doença, manutenção do estado geral bom e lesões localizadas. No estado geral ruim, as lesões disseminadas e alta carga fúngica estavam relacionadas a existência de um padrão de resposta com aumento de células CD8+ e aumento da expressão de CD8low / The occurrence of severe forms of feline sporotrichosis, along with lesions without granulomas
and rich in yeast-like forms, demonstrate the su
sceptibility of these anim
als to the disease and
emphasizes the importance of the study of its pathogenesis. The aim of this study was to describe
the inflammatory changes and fungal load at different clinical presentations and its relationship
with the profile of leukocytes in peripheral blood of cats with sporotrichosis by means of flow
cytometry (FC) technique and with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and / or Feline
Leukemia Virus (FeLV). Cats presenting cutaneous lesions with isolation of
Sporothrix
sp. in
culture were included. They were separated in groups L1, L2 and L3 (lesions in one, two and
three or more sites, respectively) and were subjected to blood sample collection and to biopsy of
the lesion. The general condition of the animal
s was classified as good, fair or poor.
Histologically, the lesions were described according to the inflammatory process (granulomatous
or nonspecific), degree of activation of predominant phagocytes within the granulomas
(macrophages or epithelioid cells), granulomas organization (well-formed or poorly formed) and
intensity of cell types
within the inflammation. The fungal lo
ad was assessed by Grocott silver
stain (GSS) technique and immunohistochemistry (IHC). The FC was applied to peripheral blood
by means of monoclonal antibodies to target CD4, CD8, CD21, CD14 and granulocytes. One
hundred and one animals were included: 20 in group L1, 22 in group L2 and 59 in group L3.
Histologically, 99 lesions showed suppurative granulomatous inflammation (SGI). Most lesions,
specially in the group L3, showed poorly formed granulomas (p-value=0.032) and predominantly
macrophages (p-value=0.010). The GSS and IHC s
howed yeast-like forms (YF) in 94 cases each
one and their concordance was noted in 92 cases.
Together, the two techniques showed sensivity
of 98.0%. The fungal load of more than 400 YF/Field (400x) occurred in 48,5% of cases by GSS
and was predominant in group L3. There was a correlation between poorly formed granulomas
with macrophages predominance and the fungal load exceeding 100 YF/Field (p-value<0.01).
The CF was performed in 33 cases of sporotrichosis and five uninfected cats (control group).
The percentage of CD8
+
T cells was greater in the groups L2 and L3 (p-value=0.001). The higher
percentage of CD4
+
T cells was correlated to group L1 and to good general condition (p-
value=0.04 and 0.03, respectively). The reduced expression of the CD8 molecule (CD8low)
occurred in 20 animals with sporotrichosis, being predominat in group L3 (p-value=0.01), and
was not observed in control group. This expression was associated with granulomas with
macrophage predominance (p-value=0.01) and occurred in 76.2% of cases with fungal load
above 100 YF/field.
Three animals were positive to FIV, four
teen to FeLV and two to both tests.
There was no correlation between these tests and the other findings. These results suggest an
association of the well-organized response, the lower fungal load and increased CD4
+
T
lymphocytes with the control of the disease, al
ong with the good general condition and localized
lesions. At the poor general condition, the dissem
inated lesions and high fungal load were
related to a response patter
n with and increase of CD8
+
T lymphocytes and particulary of the
CD8
low
expression.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/9087 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Miranda, Luisa Helena Monteiro de |
| Contributors | Pacheco, Tânia Maria Valente, Silva, Fátima da Conceiçäo |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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