Les cellules dendritiques plasmacytoïdes humaines (pDCs) ont été montrées comme les principales cellules productrices d'interférons de type I (IFN) suivant une stimulation de leurs récepteurs TLRs intracellulaires. Après activation, les pDCs contrôlent la localisation subcellulaire de ces TLRs menant à une production séquentielle de cytokines. Une première vague d’IFN due la voie IRF dans les endosomes précoces, suivi de la production des cytokines pro-inflammatoires due à la voie NfκB dans les endosomes tardifs. BAD-LAMP/LAMP5, membre de la famille des protéines LAMP, spécifique du cerveau chez la souris est également exprimée par les pDCs humaines. Nous révélons ici le rôle de BAD-LAMP dans la régulation du transport de TLR9 dans les pDCs. Suite à une stimulation par CpG, BAD-LAMP et TLR9 atteignent des endosomes spécialisés dans la signalisation IRF VAMP3+. Le blocage de BAD-LAMP altère le transport intracellulaire de TLR9 par sa rétention dans les endosomes VAMP3+. Alors que l’expression ectopique de BAD-LAMP accélère le transport de TLR9 dans les lysosomes LAMP1+. La rétention dans les compartiments VAMP3+ impact directement la signalisation TLR9, en augmentant la production IFN et en diminuant celle du TNFα. De plus, nous avons démontré que BAD-LAMP est régulée négativement par l’IFN. A l’inverse, les pDCs traitées avec des surnageants tumoraux ainsi que les pDCs infiltrant les tumeurs mammaires présentent à la fois un défaut dans la production d'IFN et un maintien de l’expression de BAD-LAMP. BAD-LAMP est donc un régulateur essentiel du transport de TLR9 dans les pDCs humaines qui traduit l’efficacité de la signalisation TLR9 dans des conditions pathologiques. / Human plasmacytoïd dendritic cells (pDCs) have been shown to be the principal producer of type-I interferons (IFNs) following intracellular TLRs stimulation. Upon activation, pDCs tightly control TLRs sub-cellular localization in specialized endosomes, leading to sequential programs of cytokines production: a first rapid wave of type-I IFN, due to IRF signalling from early endosomes, followed by pro-inflammatory cytokines production, dependent on NfκB signalling from late endosomal compartments. BAD-LAMP/LAMP5, an atypical member of the LAMP protein family, is brain specific in mice. In Human, BAD-LAMP is also expressed in pDCs. We reveal here a novel step of TLR regulation mediated by BAD-LAMP, that controls TLR9 access to, and signalling from, specialized subsets of endosomes in human pDCs. Upon CpG stimulation, BAD-LAMP and TLR9 follow a common endocytic sorting step, in order to reach early, IRF-signalling, VAMP3+ endosomes. BAD-LAMP silencing alters TLR9 traffic and promotes its retention in VAMP3+ endosomes, while ectopic BAD-LAMP expression triggers accelerated TLR9 transport to LAMP1+ lysosomes. Retention in VAMP3+ endosomes impacts directly on TLR9 signalling by increasing IFN production and decreasing TNFα. Importantly, we found that BAD-LAMP expression is down-regulated by IFN exposure. Conversely, pDCs treated with tumour supernatants or pDCs infiltrating human breast tumors, present both sustained BAD-LAMP expression, and defect in IFN production. BAD-LAMP is therefore an essential regulator of TLR9 transport in human pDCs and a marker of TLR9 signalling efficiency under pathological conditions.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2016AIXM4057 |
| Date | 07 October 2016 |
| Creators | Combes, Alexis |
| Contributors | Aix-Marseille, Gatti, Evelina, Pierre, Philippe |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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