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Identificação de imaturos de dípteros muscóides (Diptera: Calliphoridae) de importância sanitária e forense através da microscopia eletrônica de varredura

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-07-18T19:14:53Z
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Previous issue date: 2010 / CNPq E FAPERJ / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os dípteros muscóides são insetos com notável importância econômica e na entomologia
médica e veterinária devido às diversas formas como eles podem estar relacionados ao
homem, seja vetorando patógenos, causando miíases ou participando da degradação da
matéria orgânica. A entomologia forense é uma ciência que estuda o papel dos insetos na
decomposição de cadáveres e uma das principais aplicações destes nesta área é a
estimativa do intervalo pós-morte, baseada no período mínimo de atividade dos insetos no
corpo. No caso dos dípteros muscóides, que são os primeiros a chegar e podem ovipor logo
após encontrar o cadáver, o conhecimento morfológico das fases imaturas desses insetos
será mais uma ferramenta que auxiliará peritos e pesquisadores, pois em alguns casos,
ovos e larvas são as únicas evidências presentes. A microscopia eletrônica de varredura é
um instrumento que permite uma visualização mais detalhada dos caracteres morfológicos.
Algumas espécies de muscóides destacam-se devido a sua preferência alimentar, pois
buscam a matéria orgânica em decomposição para se alimentar, dentre elas podemos
destacar os califorídeos Chrysomy albiceps, Chrysomya putoria e Chrysomya megacephala.
Este trabalho teve como objetivo a identificação de ovos, larvas de primeiro, segundo e
terceiro instar e pupários destas espécies de dípteros de grande importância forense e
disseminadores de patógenos, através da utilização de microscopia eletrônica de varredura.
Foram analisados 30 exemplares de cada estágio correspondente a cada espécie,
provenientes de colônias de laboratório, estabelecidas a partir de adultos capturados no
campus da Fundação Oswaldo Cruz, RJ. Ovos e larvas foram transferidos para placas de
Petri contendo hidróxido de sódio e lavados com H 2O destilada. Depois foram fixados com
solução de glutaraldeído em tampão cacodilato de sódio e pós-fixados em tetróxido de
ósmio, desidratados em séries crescentes de acetona e submetidos ao método de secagem
pelo ponto crítico usando CO2 em aparelho de Balzers, montados em suportes metálicos e
cobertos por ouro, para permitir a visualização ao microscópio eletrônico de varredura.
Pupas com 48 a 72 horas de formação foram lavadas, congeladas e depois montadas em
suportes metálicos e cobertas por ouro para observação. Neste trabalho foi observado que a
linha mediana termina arredondada na porção anterior dos ovos de C. putoria, enquanto nas
outras duas espécies esta termina bifurcada. As ornamentações da micrópila são do tipo
projeções nos ovos de C. megacephala e C. albiceps e do tipo depressões em C. putoria. O
corpo da larva em todos os instares é muito semelhante entre as três espécies analisadas.
No entanto, somente C. albiceps apresentou o tegumento recoberto por tubérculos
organizados em fileiras ao longo do corpo da larva. No ápice dos tubérculos são
encontrados espinhos que são característicos dessa espécie. Os pupários são formados a
partir do endurecimento da cutícula da larva de terceiro instar, sendo assim, apresentaram
estruturas muito semelhantes ao instar anterior. Este estudo permitiu destacar diversas
características que podem ser utilizadas para identificar as espécies de importância sanitária
e forense, além de fornecer subsídios para a elaboração de uma chave dicotômica
específica para estes imaturos. / Muscoids diptera are insects with considerable economic importance and also in medical
and veterinary entomology because of the way that they are related to man, as vectors of
pathogens, causing myiasis or participating in organic matter degradation. Forensic
entomology is a discipline that studies the role of insects in corpse’s decomposition and one
of the most commom applications is to estimate postmortem interval by determining a
minimum period of insect activity on a decomposing body. Flies are the first visitors to a dead
body and are able to oviposit on carrion within a few hours after death. And the morphologic
knowledge from imatures can be used as a tool in crime scene investigations because,
sometimes, only eggs and larvae can be found in corpses. Scanning electron microscopy
gives detailed information about morphologic characters. Some species of diptera are
important because their larvae grow up at organic matter, such the blowflies
Chrysomya albiceps, Chrysomya putoria and Chrysomya megacephala. The aim of this
study was identify eggs, larvae of first, second and third instar and puparium of these species
of flies of forensic importance and pathogens vectors, by using scanning electron
microscopy. All the imatures examined in this study were obtained from culture set up from
wild flies trapped at Fundação Oswaldo Cruz campus, Rio de Janeiro, RJ. Thirty samples
from each species were observed. Eggs and larvae were transferred to a Petri dish with
sodium hydroxid and then washed with destilated water. After it, imatures were fixed in
glutaraldehyde in sodium cacodylate and postfixed in osmium tetroxide. They were
dehydrated in a series of acetone for critical point drying, using CO 2 in Balzers apparatus.
Specimens were adhered in metalic support and gold-coated for SEM examination. Pupae
within 48 to 72 hours-age were washed, frozen and adhered in metalic support and gold-
coated for SEM examination. Median area ends rounded anteriorly in C. putoria, whereas
ended bifurcate in others species. Micropyle showed projections at C. megecephala and
C. albiceps, but at C. putoria, micropyle was adorned by depressions. Larvae bodies were
very similar among all the species analyzed. However, only C. albiceps body tegument was
composed by tubercles organized in lines along larval body. At the apex of these tubercles
some spines are only seen at this blowfly specie. The pupae are formed from the hardening
of the cuticle of third instar larvae, thus, had structures very similar to the previous instar.
This study helped to highlight many features that could be used to identify the species of
sanitary and forensic importance, and provides subsidies for the development of a key to
these specific immature.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4193
Date January 2010
CreatorsMendonça, Paloma Martins
ContributorsGonçalves, Teresa Cristina Monte, Faria, Suzana Côrte Real, d’Almeida, José Mario, Queiroz, Margareth Maria de Carvalho
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ
RightsPaloma Martins Mendonça, info:eu-repo/semantics/openAccess

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