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Previous issue date: 2004 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica que possuem sítios de
ligação para carboidratos e/ou glicoconjugados. Uma lectina do líquen Cladonia verticillaris
foi purificada através de cromatografia de exclusão molecular. O líquen triturado foi
submetido à extração e uma purificação parcial por fracionamentos utilizando sulfato de
amônio. As amostras foram submetidas a ensaios de atividade hemaglutinante (AH) e suas
concentrações protéicas foram estimadas. A fração mais ativa, F1 (0-30 %), foi submetida a
ensaios de inibição, a ensaios de estabilidade térmica e de dependência de íons divalentes,
assim como a ensaios cromatográficos para a purificação e caracterização lectínica. ClaveLL
foi isolada através de cromatografia de exclusão molecular de F1, e submetida aos mesmos
ensaios; foi também avaliada quanto à estabilidade da AH em valores de pH compreendidos
de 2 a 12. F1 e ClaveLL foram analisadas em eletroforeses em gel de poliacrilamida (PAGE)
para proteínas nativas ácidas e básicas, assim como para proteínas desnaturadas. F1 foi inibida
parcialmente por carboidratos (N-acetil-D-glicosamina, xilose, arabinose, ramnose e manose)
e glicoproteínas (fetuína, caseína, ovalbumina e peroxidase) ou totalmente (glicoproteínas
presentes em soro fetal bovino e em soro de coelho). ClaveLL foi inibida parcialmente por
carboidratos (N-acetil-D-glicosamina, galactose, ramnose, manose, glicose e trealose) e
ovalbumina, e inibida totalmente por fetuína, asialo-fetuína, caseína, asocaseína e
glicoproteínas presentes em colostro, soro de coelho e soro fetal bovino. F1 foi termoestável,
mantendo sua AH a 80°C, enquanto ClaveLL foi sensível ao aumento de temperatura. F1 e
ClaveLL não foram dependentes de íons, mas MnCl2, BaCl2, CaCl2 e MgCl2 estimularam sua
AH. ClaveLL foi mais ativa nos valores de pH ácido (5,5) ou básico (11,0). PAGE contendo
SDS resolveu F1 e ClaveLL como única banda polipeptídica (glicosilada) com peso molecular
menor que 14 kDa. F1 glicosilada pode ter resíduos glicose/manose uma vez que se ligou à
Cramoll 1,4-Sepharose, uma matriz de afinidade com a lectina de semente de Cratylia mollis,
isoformas 1 e 4 glicose/manose específica, imobilizada à Sepharose CL-4B. PAGE para
proteínas nativas ácidas detectou em ClaveLL uma única banda que migrou junto com a
frente de corrida; o mesmo foi observado em PAGE para proteínas nativas básicas.
Cromatografia de ClaveLL através de filtração em gel em sistema ÄKTA-FPLC, resolveu três
picos distintos com AH, que sugeriram formas de agregados moleculares para a lectina nativa,
com pesos moleculares estimados em 170, 110 (pico principal) e 82 kDa. Concluindo,
ClaveLL glicosilada altamente purificada é estável a pH e principalmente inibida por
glicoproteínas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2059 |
| Date | January 2004 |
| Creators | Dalvina Correia da Silva, Michele |
| Contributors | Cassandra Breitenbach Barroso Coelho, Luana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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