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Previous issue date: 2013-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infectious disease caused by parasitic protozoa of the genus Leishmania, whose most prevalent species in Brazil is L. (Viannia) braziliensis. The human macrophage infection with L. (V.) braziliensis has been poorly investigated and is not known whether leukotrienes, lipid mediators produced by macrophages, may modulate this infection. The objective of this study was to evaluate whether leukotrienes modulate infection of human macrophages with L. (V.) braziliensis IMG3, a field clinical isolate. Human monocyte-derived macrophages were infected with promastigote forms of MHOM/BR/2003/IMG (IMG3) at a ratio of ~ 10:1 (parasite:cell). Cultures were incubated for 4 h and then washed to remove excess extracellular parasites, and incubated for additional 24, 48 or 72 h. To inhibit leukotriene synthesis, the cultures were treated with MK0591 and to antagonize the LTB4 receptor, CP-105, 696. LTB4 was also added to the cultures. The measurement of LTB4 was performed on culture supernatants using enzyme immunoassay. To evaluate the involvement of reactive oxygen intermediates (ROI) and nitric oxide (NO) their respective inhibitors were used, apocynin and aminoguanidine. To assess the production of ROIs it was used nitroblue tetrazolium salt (NBT). The IMG3 infected human macrophages, being selected periods of 4 h and 48 h incubation to assess phagocytosis and microbicidal activity, respectively. Treatments with MK0591 or CP105, 696 significantly increased the infection index after 4 h or 48 h incubation (p <005). The results show that the presence of MK0591 is need during whole incubation time (48 h) but not the LTB4 antagonist, whose effect is maintained after incubation for 4 h. The addition of LTB4 to the cultures significantly decreased macrophage infection, both during the first 4 h and after 48 h of incubation (p <0.05). The parasites induced LTB4 production in macrophage cultures during the first 30 min, but this production decreased after 4 h (p <0.05). The ROI and NO inhibitors significantly increased the infection index, before (ROI and NO) or after treatment with LTB4 (ROI). Preliminary results showed that production of superoxide anion is induced by parasites and this is further increased by LTB4. In conclusion, the results suggest that human macrophages produce leukotrienes following infection with L. (V.) braziliensis, and the main of them is LTB4. The LTB4 inhibits phagocytosis and enhances the microbicidal activity of macrophages, contributing to control of the infection. Results suggest that L. (V.) braziliensis induces LTB4, NO and ROI production and, in turn, LTB4 increases the microbicidal activity of macrophages via increase of ROI. Understanding the involvement of leukotrienes in the control of human macrophage infection with L. (V.) braziliensis can lead to the development of novel therapeutic targets for ATL. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, cuja espécie mais prevalente no Brasil é L. (Viannia) braziliensis.A infecção de macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis tem sido pouco estudada e não é conhecido se os leucotrienos, mediadores lipídicos produzidos por macrófagos, podem modular a infecção destas células por este parasito. O objetivo deste trabalho foi avaliar se os leucotrienos modulam a infecção de macrófagos humanos pelo isolado L. (V.) braziliensis IMG3. Macrófagos humanos foram derivados de monócitos do sangue periférico e infectados com formas promastigotas do isolado MHOM/BR/2003/IMG (IMG3) na proporção de ~10:1 (parasitos:célula). As culturas foram incubadas por 4 h, sendo em seguida lavadas para retirar o excesso de parasitos extracelulares, e incubadas por adicionais 24, 48 ou 72 h. Para inibir a síntese dos leucotrienos, as culturas foram tratadas com MK0591 e para antagonizar o receptor de LTB4, CP-105,696. O LTB4 também foi adicionado às culturas. A dosagem de LTB4 foi realizada nos sobrenadantes das culturas, usando ensaio imunoenzimático. Para avaliar a participação de espécies intermediárias do oxigênio (ROI) e do óxido nítrico (NO), foram utilizados os seus respectivos inibidores, apocinina e aminoguanidina. Para avaliar a produção de ROIs foi utilizada a técnica do azul de tetrazólio (NBT). O isolado IMG3 infectou os macrófagos humanos, sendo selecionados os períodos de 4 h e 48 h de incubação para avaliar a fagocitose e a atividade microbicida, respectivamente. Os tratamentos com MK0591 ou CP105,696 aumentaram significantemente o índice de infecção, após 4 h ou 48 h de incubação (p < 005). Os resultados mostraram que há necessidade da presença do composto MK0591 durante todo o período de incubação (48 h), mas não a do antagonista do LTB4, cujo efeito é mantido após incubação por 4 h. A adição de LTB4 às culturas diminuiu significantemente a infecção dos macrófagos, tanto durante as primeiras 4 h quanto após 48 h de cultura (p < 0,05). Os parasitos induziram a produção de LTB4 nas culturas de macrófagos nos primeiros 30 min, caindo esta produção após 4 h (p < 0,05). Além disso, o uso de inibidores de ROI e NO aumentaram significantemente a infecção de macrófagos antes (ROI e NO) ou após a ativação com LTB4 (ROI). Os resultados preliminares mostram a produção de ânion superóxido, induzida pelos parasitos e uma tendência no aumento pelo LTB4. Em conclusão, os resultados sugerem que os macrófagos humanos produzem leucotrienos após a infecção por L. (V.) braziliensis, sendo o LTB4 o principal leucotrieno produzido. O LTB4 inibe a fagocitose e aumenta a atividade microbicida dos macrófagos, contribuindo para diminuir a infecção. Os resultados sugerem que há produção de ROI e NO após infecção com L. (V.) braziliensis e que o LTB4 aumenta a atividade microbicida dos macrófagos via aumento da produção de ROI. Entender a participação dos leucotrienos no controle da infecção de macrófagos humanos por L. (V.) braziliensis pode levar à descoberta de novos alvos terapêuticos para a LTA.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/3652 |
| Date | 22 February 2013 |
| Creators | Morato, Camila Imai |
| Contributors | Dias, Fátima Ribeiro |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Pública (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8197219506590464977, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 5989919188376747614, 2075167498588264571 |
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