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Theo de Araújo Santos Corpusculos lipídios e eicosanoides nos momentos iniciais...pdf: 8310647 bytes, checksum: 79f3b7453e377fceaa874dda0b7901fe (MD5)
Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Corpúsculos lipídicos são organelas citoplasmáticas envolvidas na produção de eicosanoides
em leucócitos. Eicosanoides como as prostaglandinas têm sido envolvidos no controle da
resposta inflamatória e imunológica. A saliva de Lutzomyia longipalpis participa do
estabelecimento e desenvolvimento da doença pela modulação das respostas hemostática,
imunológica e inflamatória do hospedeiro favorecendo a infecção. Entretanto, o papel dos
eicosanoides nos momentos iniciais da infecção por Leishmania ainda não foi esclarecido,
assim como a participação da saliva neste contexto. Aqui, nós investigamos o papel dos
eicosanoides induzidos pela saliva de L. longipalpis e produzidos pela Leishmania infantum
chagasi na infecção. O sonicado de glândula salivar (SGS) de L. longipalis induziu um
aumento no número de CLs em macrófagos de maneira dose e tempo dependente, o qual
esteve correlacionado com o aumento de PGE2 nos sobrenadante de cultura. As enzimas COX-
2 e PGE-sintase foram co-localizadas nos CLs induzidos pela saliva e a produção de PGE2 foi
reduzida pelo tratamento com NS-398, um inibidor de COX-2. Nós verificamos que o SGS
rapidamente estimulou a fosforilação de ERK-1/2 e PKC-α e a inibição farmacológica dessas
vias inibiu a produção de PGE2 pelos macrófagos estimulados com SGS. Em seguida, nós
avaliamos o efeito da saliva de L. longipalpis sobre a produção de eicosanoides durante a
infecção por L. i. chagasi no modelo peritoneal murino. Nós observamos que a saliva
aumentou a viabilidade intracelular de L. i. chagasi tanto em neutrófilos como em neutrófilos
recrutados para a cavidade peritoneal. As células recrutadas para cavidade peritoneal
apresentaram maiores níveis da relação PGE2/LTB4 e o pré-tratamento com NS-398 reverteu o
efeito da saliva sobre a viabilidade intracelular dos parasitas. Parasitas como Leishmania são
capazes de produzir PGs utilizando uma maquinaria enzimática própria. Neste estudo nós
descrevemos a dinâmica de formação e a distribuição celular dos CLs em L. i. chagasi bem
como a participação desta organela na produção de PGs. A quantidade de CLs aumentou
durante a metaciclogênese assim como a expressão de PGF2α sintase (PGFS), sendo esta
enzima co-localizada nos CLs. A adição de ácido araquidônico AA à cultura de L. i. chagasi
aumentou a quantidade de CLs por parasita, bem como a secreção de PGF2α. A infecção com
as diferentes formas de L. i. chagasi não foi capaz de estimular a formação de CLs na célula
hospedeira. Por outro lado, os parasitas intracelulares apresentaram maiores quantidades de
CLs. A infecção estimulou uma rápida expressão de COX-2, mas não foi detectado aumento
na produção de PGF2α nos sobrenadantes. Por fim, nós verificamos a presença do receptor de
PGF2α (FP) nos vacúolos parasitóforos de macrófagos infectados com L. i. chagasi. O prétratamento
das células com um antagonista do receptor FP inibiu os índices de infecção de
forma dose-dependente. Em conjunto, nossos dados apontam que os eicosanoides
desempenham um papel crucial para evasão da resposta imune durante os momentos iniciais
da infecção por L. i. chagasi com diferentes contribuições do parasita, do vetor e da célula
hospedeira neste contexto. / Lipid bodies (LB) are cytoplasmic organelles involved in eicosanoid production in leukocytes.
Eicosanoids as prostaglandins (PG) have been implicated in the inflammatory and immune
response control. Sand fly saliva participates of the establishment and development of the
disease by modulation of haemostatic, inflammatory and immunological response of the host
favoring the infection. However, the role of eicosanoids in the early steps of the infection
remains to be investigated as well as the role of the sand fly in this context. Herein, we
investigated the role of eicosanoids trigged by L. longipalpis saliva and produced by
Leishmania infantum chagasi during infection. L. longipalpis salivary gland sonicate (SGS)
induced an increase of LB number in the macrophages of a dose and time dependent manner,
which was correlated with an increase of PGE2 release in the culture supernatants.
Furthermore, COX-2 and PGE-synthase co-localized within the LBs induced by L. longipalpis
saliva and PGE2 production was abrogated by treatment with NS-398, a COX-2 inhibitor. We
verified SGS rapidly triggered ERK-1/2 and PKC-α phosphorylation, and blockage of the
ERK-1/2 and PKC-α pathways inhibited the SGS effect on PGE2 production by macrophages.
Next, we evaluated the effect of the L. longipalpis saliva in the eicosanoid production during
L. i. chagasi in the murine peritoneal model. We observed SGS increased parasite viability
inside recruited monocytes and neutrophils. In this regarding, SGS-recruited cells to peritoneal
cavity displayed an increase in the levels of PGE2/LTB4 and the pre-treatment with NS-398
abrogated the sand fly saliva effect on parasite viability. Parasites as Leishmania are capable
to produce PGs using enzymatic machinery itself. Parasite LBs amounts increased during
metacyclogensis as well as the PGF2α synthase (PGFS) expression and this enzyme was colocalized
on LBs. Exogenous addition of aracdonic acid in the Leishmania cultures increased
LB number per parasite and PGF2α release. Macrophage infection with different forms of L. i.
chagasi was not able to stimulate LB formation in the host cell. Notwithstanding, Leishmania
infection upregulated COX-2 expression but this was not followed by PGF2α release by
macrophages. We detected PGF2α receptor (FP) on the Leishmania PV surface. In addition, the
pre-treatment of the host cells with a selective antagonist of FP, dramatically hampered
Leishmania infection in a dose dependent manner. In set, our data point out a crucial role for
eicosanoids to immune response evasion during early steps of L. i. chagasi infection with
different contributions of parasite, vector and host cells in this context.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/7222 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Santos, Théo de Araújo |
| Contributors | Bozza, Patrícia Torres, Lima, Célio Geraldo Freire de, Melo, Christianne Bandeira de, Melo, Rossana Correa Netto de, Veras, Patrícia Sampaio Tavares, Borges, Valéria de Matos, Borges, Valéria de Matos |
| Publisher | Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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