Le blé est la seconde céréale la plus produite dans le monde. Il constitue une importante source de denrées alimentaires et de beaucoup d'autres usages industriels. La compréhension des mécanismes impliqués dans le développement du grain de blé est fondamentale pour développer des blés à valeur ajoutée. La physiologie du grain de blé et les mécanismes moléculaires impliqués dans son développement nécessitent d'être mieux connus et ces connaissances pourront être très utiles pour l'amélioration du blé mais aussi des autres céréales. L'approche protéomique a été aussi utilisée dans ce contexte mais aucun travail n'avait jusqu'ici été réalisé sur la totalité des phases de développement des tissus et sur des intervalles de temps très courts. La caractérisation des changements d'expressions protéiques dans les couches périphériques du grain et de l'albumen est présentée dans cette étude. Nous avons utilisé les grains de Triticum aestivum de la variété Récital, cultivés à l'INRA de Clermont-Ferrand. Les grains ont été prélevés tous les 50°C jour (°Cj) depuis la fécondation jusqu'à la maturité sur 15 stades de développement pour les couches périphériques et sur 21 stades pour l'albumen amylacé. Pour chaque échantillon, les couches périphériques des grains ont été disséquées et les protéines totales extraites. L'analyse des protéines en électrophorèse bidimensionnelle puis par spectrométrie de masse MALDI-TOF a permis d'identifier via l'interrogation des bases de données, 207 protéines différentiellement exprimées sur 15 stades de développement (0°Cj-700°Cj). Ces protéines ont ensuite été classées en 16 classes fonctionnelles. L'analyse en cluster a révélé 5 profils d'expression au cours du temps. Parallèlement, l'albumen amylacé a été isolé des grains et les protéines métaboliques de ce tissu extraites. Après électrophorèse bidimensionnelle des protéines, 487 protéines variant significativement dans l'albumen sur l'ensemble des stades de développement (0°Cj-1006°Cj) ont été identifiées par utilisation de la LC-MS. Les protéines ont été réparties sur neuf profils d'expression et 17 fonctions biochimiques. Le protéome des couches périphériques a ensuite été comparé au protéome de l'albumen dans le but de comprendre si l'évolution des processus biochimiques diffère dans chacun de ces tissus. Au final, nous avons optimisé l'intégration des données protéomiques avec celles du transcriptome (en se focalisant sur les protéines du métabolisme carboné). Seulement 32% des profils d'expression protéome/transcriptome montrent une corrélation significative au cours du développement (152°Cj-700°Cj). Les profils d'expression des enzymes ont été comparés sur les deux niveaux. Ils devraient permettre de distinguer les processus régulés au niveau du transcriptome de ceux régulés au niveau du protéome. L'ensemble de ces données pourra être compilé dans une base de données propre de la variété Récital et utilisé comme référence dans l'étude des maladies et des stress abiotiques des tissus du grain de blé en développement.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:CCSD/oai:tel.archives-ouvertes.fr:tel-00923145 |
| Date | 04 July 2012 |
| Creators | Tasleem-Tahir, Ayesha |
| Publisher | Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II |
| Source Sets | CCSD theses-EN-ligne, France |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | PhD thesis |
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