La littérature actuellement disponible visant à explorer la physiologie du tube digestif des larves de la mouche soldat noire (Hermetia illucens) est incapable de caractériser l'ensemble du corps des larves. La méthodologie d'histologie utilisant soit de la paraffine soit de la résine époxy permet d'observer la morphologie cellulaire. De plus, elle ne préserve pas les aspects physiologiques des tissus comme les enzymes. La méthode de substitution par congélation est préconisée car elle minimise la dénaturation des protéines et préserve les enzymes dans leur état réactif après incorporation dans le méthacrylate de glycol. La cuticule des insectes présente généralement un obstacle pour les processus histologiques car les échanges de liquides à travers cette barrière sont limités. Ainsi, la perforation de cette membrane est essayée pour permettre l'inclusion. Différentes méthodes de pré-traitements et de déshydratation sont utilisées dans ce travail afin optimiser le protocole d'inclusion du glycol méthacrylate. Les coupes histologiques obtenues ont été soumises à une coloration enzymatique afin de localiser ces protéines dans le tube digestif des larves. La qualité des lames histologiques obtenues a été évaluée sur la base de la conservation, de la fragilité des tissues et de la quantité corps gras présent dans la larve. La perforation de la chitine ne présente aucun effet bénéfique sur la qualité des lames produites. En revanche, la substitution par congélation suivie de l'inclusion de méthacrylate s'est révélé être une méthode viable pour des applications histologiques sur les larves d'insectes. Les résultats montrent qu'une composante de la trypsine liée à la membrane est localisée dans la partie postérieure de l'intestin moyen, tandis que les composantes de l'α-galactosidase soluble et liée à la membrane sont localisées dans la partie antérieure de l'intestin moyen. La trehalase n'a pas pu être localisée dans le tube digestif des larves en raison d'un protocole défectueux. / The current literature aimed at exploring the digestive physiology of the larvae of the black soldier fly (Hermetia illucens) is unable to characterise the whole body of the larvae. These studies have either used paraffine or epoxy, which are sufficient for observing cell morphology, however these methods do not preserve certain aspects of the physiology such as enzymes. Freeze-substitution followed by subsequent embedding in glycol methacrylate is a preferable method as it minimizes protein denaturation and preserves enzymes in their reactive-state. The cuticle of insects commonly presents an obstacle for histological processes, as the sclerotized chitin prevents liquid exchange, the puncturing of the chitin is one way to circumvent this issue. Larvae were subjected to no pre-treatment, puncturing the chitin before or after freezing or the removal of the chitin and daily dehydrations to optimise the embedding protocol, upon optimising this protocol the sections were subjected to enzyme staining for localizing enzymes in the digestive tract, to localize the enzyme activity in the digestive tract. The slides were evaluated based on the preservation, brittleness of the tissue and on the relative amount of fat body present in the insect. The puncturing of the chitin was found to have no beneficial effect on the quality of the slides produced, freeze-substitution and methacrylate inclusion were shown to be a viable method for histological applications on these larvae. Furthermore, a membrane-bound version of trypsin was localized in the posterior part of the midgut, whereas both the solubilized and membrane-bound versions of α-galactosidase were localized within the anterior part of the midgut, trehalase was unable to be localized, most likely due to a faulty protocol.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/69802 |
| Date | 12 August 2021 |
| Creators | Beniers, Julian |
| Contributors | Vandenberg, Grant William |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | mémoire de maîtrise, COAR1_1::Texte::Thèse::Mémoire de maîtrise |
| Format | 1 ressource en ligne (viii, 53 pages), application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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