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Previous issue date: 2001-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A família Coccinellidae (Coleoptera) apresenta, aproximadamente, 4.000 espécies. Muitas delas têm sido utilizadas com eficiência tanto em programas de manejo de pragas quanto em estudos relacionados com impacto ambiental, causado por plantas transgênicas. As análises citogenéticas, na família Coccinellidae, espécies, foram sendo que realizadas a maioria somente em, aproximadamente, 4,3% das restringiu-se à descrição do número de cromossomos. Neste trabalho, foram realizadas análises citogenéticas em Eriopis connexa, Olla v-nigrum e Cycloneda sanguinea, visando: 1. adaptar a técnica para obtenção de cromossomos em células mitóticas e meióticas; 2. determinar o número e morfologia dos cromossomos metafásicos por coloração convencional; 3. avaliar o comportamento dos cromossomos durante a meiose, descrevendo o sistema de determinação sexual; 4. caracterizar a distribuição da heterocromatina constitutiva utilizando banda-C, banda HSS (Hot Saline Solution), enzimas de restrição (Msp-I e Hae-III) e fluorocromo (CMA 3 ); 5. aplicar metodologia de banda Ag-NOR para localizar a atividade gênica da região organizadora de nucléolo; 6. mapear, por meio de FISH, os cromossomos carreadores de genes rDNA. O número cromossômico foi 2n=18+XX para fêmeas e 2n=18+Xy para os machos, em todas as espécies. A única espécie que apresentou um cromossomo B eucromático restrito a fêmeas foi E. connexa. A meiose dos machos revelou a meio-fórmula n=9+Xy p , e o modo de associação dos cromossomos sexuais foram do tipo pára-quedas, em todas as espécies. Em C. sanguinea, durante a prófase I (paquíteno), a associação dos cromossomos sexuais ocorreu de maneira ponta-a- ponta linearmente até formar um pseudo-anel. Os resultados das metáfases mitóticas avaliadas por banda NOR, tanto em E. connexa quanto em C.sanguinea , mapearam a região organizadora de nucléolo ativa em um par autossômico. A análise com fluorocromo CMA 3 , realizada em E. connexa, foi consistente com a banda NOR sendo positiva nesta região. Em células meióticas de O. v-nigrum, a região NOR ativa esteve presente na vesícula sexual, sendo confirmada por FISH com genes rDNA. Entretanto, os resultados das análises da mitose e meiose de C. sanguinea , por banda NOR e coloração seqüencial FISH/AgNOR, foram controversos. Os genes ativos localizaram-se em um par autossômico (metáfase espermatogonial), porém a vesícula sexual (prófase I) e o lúmen do pára-quedas (metáfase I) ficaram fortemente impregnados por prata. O FISH mapeou os genes rDNA fora da vesícula sexual. Com base nestes resultados sugeriu-se que essas substâncias sejam proteínas nucleolares, sintetizadas pelo par autossômico e importadas durante a associação dos cromossomos sexuais (prófase I). Tanto em C. sanguinea quanto em E. connexa, a heterocromatina constitutiva avaliada por banda-C, localizou-se principalmente na região pericentromérica de todos os cromossomos. Esta região foi rica em pares de base GC (digerida pela Hae III). Entretanto, alguns blocos de heterocromatina constitutiva (telômeros) não foram digeridos. A banda HSS (Hot Saline Solution) extraiu toda a heterocromatina, sugerindo-se que a heterocromatina seja rica, também, em seqüências repetitivas de bases AT, conferindo, portanto, uma natureza molecular heterogênea. A utilização da enzima Msp-I forneceu resultado negativo. / The family Coccinellidae (Coleoptera) comprises about 4,000 species in which some environmental of them disturbance are used studies in pest caused by management transgenic programs plants. and in Cytogenetic analyses of Eriopis connexa, Olla v-nigrum and Cycloneda sanguinea were made with the following purposes: 1. Modification of methodology with the purpose of obtaining best mitotic and meiotic chromosome preparations; 2. Establishment of number and morphology of mitotic chromosomes obtained by conventional staining; 3. Evaluation of meiotic chromosome behavior and description of sexual determination system; 4. Characterization of constitutive heterochromatin by C-band, HSS-band (Hot Saline Solution), restriction enzymes (Msp-I and Hae III), and CMA 3 fluorochrome; 5. Determination of genetic activity of NOR-region by Ag-NOR band; 6. Application of FISH methodology with the purpose of locating the chromosomes with rDNA genes. All the species studied showed 2n = 18 + XX for females and 2n = 18 + Xy for males. E. connexa was the only species with an euchromatic B-chromosome in female individuals. The male meiosis showed n= 9 + Xy p , with a parachute association of sexual chromosomes in all species studied. In prophase I of C. sanguinea , the association of sexual chromosomes were initially end -to-end, finishing in a pseudo-ring formation. The NOR-band technique in E. connexa and C. sanguinea showed the nucleolar organizing region in a pair of autosomic chromosomes. These chromosomes in E. connexa were also stained by CMA 3 fluorochrome. Both NOR and CMA 3 bands stained the same chromosome region. In meiotic cells of O. v -nigrum, an active NOR-region was observed in sexual vesicle, which was confirmed by FISH/rDNA probe. However, the results of C-band and sequential staining by FISH/agNOR were controversial. The functional genes were located in an autosomic pair (spermatogonial metaphase); however, the sexual vesicle (prophase I) and the parachute lumen (metaphase I) were staining strongly with Ag. The FISH methodology showed the rDNA genes out of the sexual vesicle. These results suggested that nucleolar proteins made in the autosomic pair were imported during the association of sexual chromosomes (prophase I). Both in C. sanguinea and E. connexa, constitutive heterochromatin showed by C-band was found mainly in pericentromeric regions of all chromosomes. These regions were GC-rich (digested by Hae III), but some heterochromatic blocks (telomere) were not digested by Hae III). The HSS band extracted all the heterochromatin, suggesting that this chromosome region was also AT-rich with a heterogeneous molecular nature. A negative result was seen with digestion by Msp I restriction enzyme. / Tese importada do Alexandria
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/11013 |
| Date | 23 March 2001 |
| Creators | Maffei, Eliane Mariza Dortas |
| Contributors | Campos, Lucio Antonio de Oliveira, Santos, Jorge Abdala Dergam dos, Pompolo, Silvia das Graças |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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