Neisseria meningitidis är en bakterie som kan leda till invasiv sjukdom eller endast orsaka bärarskap i nasopharynx. Bakterien delas in i olika serogrupper och klonala komplex. Vissa av dessa grupper och klonala komplex förekommer endast hos invasiva isolat och andra bland bärare, vilket tyder på att det finns genetiska skillnader mellan invasiva och bärarisolat. I denna studie undersöktes genen pilE som kodar för PilE proteinet och ingår i bakteriens pili. Proteinet finns i två klasser, klass 1 och klass 2. Metoden som användes för att studera eventuella skillnader i förekomst och uttryck av pilE genen var digital droplet PCR (ddPCR). Både DNA och RNA kvantifierades med ddPCR för att undersöka antalet kopior av pilE genen (DNA) samt dess uttryck (RNA) mellan invasiva isolat och bärarisolat, mellan klass 1 pilE isolat och klass 2 samt fördelning av klasserna i isolattyperna. Principen för ddPCR är att dela ett prov till tiotusentals nanodroppar där individuella droppar genomgår PCR för en senare avläsning av flourescens från prober. Resultatet visade skillnad mellan bärarisolat och invasiva isolat där de invasiva isolaten visade mindre uttryck av pilE än bärarisolat. Klass 2 isolat hade signifikant färre genuttryck än klass 1 isolat och invasiva isolat visade klass 2 i högre utsträckning än bärarisolat. / Neisseria meningitidis is a bacterium that can cause invasive disease or carriage in the nasopharynx. The bacteria are divided into different serogroups and clonal complexes. Specific serogroups and clonal complexes are more frequent or are only found among invasive isolates or in carriage isolates. This study has investigated pilE, a gene that encodes the PilE protein located in the bacteria´s pilin and the protein is found in either class 1 or class 2. digital droplet PCR was used to investigate differences in presence and expression of the gene pilE. Both DNA and RNA was quantified to study the difference in copy number of the pilE gene (DNA) and its expression (RNA) between invasive isolates and carriage isolates but also between class 1 isolates and class 2 isolates. The distribution of classes between the isolate types was also investigated. The ddPCR method divides a sample into thousands of nanodroplets and a PCR reaction occurs in each droplet followed by droplet reading where fluoroscens from probes is measured. The difference that could be seen was that the invasive isolates expressed pilE in lower copies. Class 2 isolates had a significantly lower gene expression than class 1 isolates and invasive isolates expressed class 2 in a higher frequency.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:oru-106684 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Al-Haseny, Sara |
| Publisher | Örebro universitet, Institutionen för hälsovetenskaper |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.1751 seconds