Le macrophage constitue l’un des mécanismes de défense cellulaire contre les pathogènes. Le rôle principal du macrophage est l’initiation ainsi que la résolution de l’inflammation lors d’infection. Notre laboratoire s’intéresse au CD200, une molécule anti-inflammatoire présente sur les macrophages. Certaines études ont montré que le CD200 est impliqué dans la résolution de l’inflammation. Notre hypothèse était qu’une absence de CD200 augmente les fonctions inflammatoires des macrophages dérivés de la moelle osseuse (BMDMs) ce qui pourrait être causé par une modulation de la différenciation des BMDMs. Pour ce faire, nous avons utilisé des BMDMs différenciés avec un facteur de stimulation des colonies de granulocytes et de macrophages (GM-CSF) pendant 9 jours à partir de moelle osseuse de rats Sprague Dawley déficients pour le CD200 (CD200 KO) (générés par notre équipe). L’impact de l’absence du CD200 sur la différenciation et l’activation des BMDMs par stimulation au lipopolyssaccharide (LPS) a été étudié. L’expression de molécules présentatrices d’antigènes a été mesurée par cytométrie en flux, la sécrétion de cytokines par ELISA et la phagocytose par essai fluorométrique avec Pseudomonas aeruginosa. Au cours de la différenciation, les BMDMs augmentent l’expression de CD200 et CD200R. L’absence du CD200 altère l’expression des molécules associées à la présentation d’antigènes (MHCII, CD80 et CD86) lors de la différentiation. Par contre, l’absence du CD200 n’affecte pas la phagocytose. De plus, l’absence du CD200 diminue la sécrétion de cytokines suite à une stimulation au LPS. Ces résultats sont associés à une diminution de la surexpression du Toll-like receptor 4(TLR-4), le récepteur du LPS. En conclusion, l’absence de CD200 module la différenciation des BMDMs in vitro et,contrairement à notre hypothèse, l’absence du CD200 sur les BMDMs limite l’expression des molécules présentatrices d’antigènes et la sécrétion de cytokines. Les mécanismes de réponse aux pathogènes que l’absence du CD200 affecte sont encore inconnus, mais pourraient impliquer la voie du TLR-4. / The first line of cell defense against pathogens is the macrophages. The main function of this cell is to be able to maintain immune homeostasis. The CD200 is an anti-inflammatory molecule expressed by on many cell types, including macrophages. Some studies have shown that the CD200-CD200R pathway is involved in the resolution of inflammation. Our hypothesis was that the absence of CD200 on bone marrow derived macrophages (BMDMs) will change their differentiation pattern and increase their inflammatory functions. BMDMs were differentiated from Sprague Dawley rat’s bone marrow with GM-CSF for 9 days, and the expression of CD200 and CD200R was measured by flow cytometry. The inflammatory response of BMDMs from wild type and CD200 knock out rats (generated by our team) was measured after LPS stimulation. The expression of molecules associated with antigen presentation was quantified by flow cytometry. Cytokine secretion was measured by ELISA and phagocytosis activity was measured by a fluorescence assay with Pseudomonas aeruginosa. BMDMs increased CD200 and CD200R expression during the differentiation process. The absence of CD200 altered the expression of antigen presentation molecules (MHCII, CD80 and CD86) during the differentiation, but did not modulate the phagocytosis function of BMDMs. In addition, CD200 KO BMDMs secreted lower levels of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines following LPS exposition. These results are associated with a reduction of TLR-4 overexpression, the LPS receptor. In conclusion, CD200 deficiency modulates the differentiation process of BMDMs and limits the expression of markers associated with pathogen-presentation and cytokines secretion. The implication of CD200 absence in pathogens response mechanism is still unknow but could include markers from the TLR-4 pathway.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/66902 |
| Date | 31 January 2021 |
| Creators | Tardif-Pellerin, Éliane |
| Contributors | Lauzon-Joset, Jean-François, Bissonnette, Elyse |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | mémoire de maîtrise, COAR1_1::Texte::Thèse::Mémoire de maîtrise |
| Format | 1 ressource en ligne (xiii, 65 pages), application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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