FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A NEM1 à uma sÃndrome rara com padrÃo de transmissÃo autossÃmico dominante, causada por uma mutaÃÃo que inativa o gene MEN1 (gene supressor tumoral). Define-se sua presenÃa pela ocorrÃncia associada de dois dos trÃs principais tumores endÃcrinos relacionados à NEM-1: hiperparatireoidismo primÃrio (HPT), adenomas hipofisÃrios (AH) e tumores gastroenteropancreÃticos (TEPs) secretores ou nÃo. O gene MEN1, envolvido nessa sÃndrome, consiste de 10 exons (exon 1 e 832 bases do exon 10 nÃo sÃo traduzidos), codificando uma proteÃna que contem 610 aminoÃcidos, denominada MENIN. Mais de 459 diferentes mutaÃÃes germinativas jà foram identificadas em famÃlias com NEM1. Um total de 8 famÃlias e 2 casos esporÃdicos foram estudados, perfazendo um total de 33 pacientes com NEM1. Foram coletados 4mL de sangue perifÃrico para extraÃÃo de DNA e RNA utilizando os kits QIAamp DNA Blood Mini e QIAamp RNA Blood Mini, respectivamente, ambos da QIAGENÂ. Os nove exons da regiÃo codificadora do gene MEN1 foram amplificados por PCR e submetidos, apÃs purificaÃÃo, à reaÃÃo de sequenciamento. Em seguida as amostras foram analisadas atravÃs de eletroforese capilar. As sequÃncias geradas foram analisadas utilizando o software CondonCode Aligner, afim de traÃar um perfil mutacional. As amostras de RNA foram convertidas em cDNA e analisadas em PCR tempo real. A idade mÃdia dos pacientes estudados foi de 40,7Â12,7 anos, onde a prevalÃncia dos tumores associados a NEM1 foi: HPT, 87,8% (29/33); adenoma hipofisÃrio, 81,8% (27/33); TEPs, 54,5% (18/33); outros tumores associados a NEM1, 63,6% (21/33). Como primeira manifestaÃÃo nesses pacientes, os adenomas hipofisÃrios prevaleceram, ocorrendo em 57,5% (19/33). ApÃs sequenciamento automÃtico de toda a regiÃo codificadora do gene MEN1, foram encontradas mutaÃÃes germinativas em sete famÃlias portadoras de NEM1 estudadas e em um dos casos esporÃdicos. TrÃs diferentes mutaÃÃes foram identificadas, estando presentes nos exons 3 e 6: duas do tipo misssense (mutaÃÃes pontuais), c.597 C>T (H199H) e c.830 C>G (P277R); e uma do tipo splice-site (mutaÃÃes nas regiÃes de junÃÃo exon-intron), c.654 +1 G>T (IVS3+1G→T). NÃo foi possÃvel estabelecer uma associaÃÃo entre genÃtipo-fenÃtipo nesses pacientes portadores de NEM1. Foram observadas diferenÃas no perfil de expressÃo. O gene MEN1, nos pacientes com NEM1 estudados, estava regulado negativamente, quando comparado ao grupo controle. / MEN-1 is a rare autosomal dominantly inherited syndrome caused by a mutation that inactivates the MEN1 gene (tumor suppressor gene). The clinical manifestation of MEN-1 is defined by the associated occurrence of at least two of the three main endocrine tumors related to MEN1: primary hyperparathyroidism (PHP), pituitary adenoma (PA) and gastroenteropancreatic tumors (GEPs). The MEN1 gene, involved in the syndrome, consists of 10 exons (exon 1 and 832 bases of exon 10 are not translated) encoding a protein that contains 610 amino acids called MENIN. Over 459 different germline mutations have been identified in families with MEN1. A total of eight families and two sporadic cases were studied, resulting in 33 patients with MEN1, with 31 familiar MEN1 and two sporadic MEN1. Four milliliters of peripheral blood were collected for DNA and RNA extraction using the QIAamp DNA Blood Mini and QIAamp RNA Blood Mini Kits from QIAGENÂ. Each of the nine coding exons of the MEN1 gene was amplified by the Polymerase Chain Reaction (PCR). The PCR products were purified and standard protocols were used for cycle sequencing. Sequences were determined after capillary electrophoresis and analyzed using the software CondonCode AlignerÂ, in order to draw a mutational profile. RNA samples were converted into cDNA and analyzed in real time PCR. The average age of patients was 40.7  12.7 years, and the prevalence of tumors associated with MEN1 was: PHP, 87.8% (29/33), pituitary adenoma, 81.8% (27/33); GEPs, 54.5% (18 / 33), other tumors associated with MEN1, 63.6% (21/33). As the first manifestation in these patients, the pituitary adenomas prevailed, occurring in 57.5% (19/33). After automated sequencing of the entire coding region of the MEN1 gene, germline mutations were found in seven MEN1 families and in one of the sporadic cases. Three different mutations were identified: two missense mutations, c.597 C>T (H199H) e c.830 C>G (P277R); and one splice-site mutation, c.654 +1 G>T (IVS3+1G→T). We could not find any association between genotype-phenotype in these MEN1 patients. Differences in the gene expression profile were observed. The MEN1 gene in the studied patients was down regulated, when compared to healthy individuals.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:7519 |
| Date | 06 September 2012 |
| Creators | Daniel Pascoalino Pinheiro |
| Contributors | Manoel Odorico de Moraes Filho, Alexandre Havt BindÃ, Catarina Brasil d'Alva |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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