Gallstas är ett patologiskt tillstånd där antingen produktionen eller flödet av galla är hämmat. Orsaken kan vara mekaniskt stopp och kallas då för extrahepatisk eller annan underliggande kronisk leversjukdom och kallas då för intrahepatisk. Vid gallstas samlas kopparassocierat protein (KAP) i levern. Dessa proteiner kan synliggöras med orcein. Orcein är en histokemisk färg som färgar KAP, och elastiska fibrer. Syftet med arbetet är att utifrån etablerade orceinprotokoll utföra avvikelser för att se hur dessa påverkar orceins förmåga att synliggöra elastiska fibrer. Metoden ska valideras med positivt kontrollmaterial för att på sikt användas inom diagnostik för att påvisa KAP i levervävnad vid avdelningen för Klinisk patologi i Region Kalmar Län. Som kontrollmaterial användes tunntarm och extransplanterad cirrotisk lever. Initialt testades etablerade protokoll och utifrån resultaten gjordes fortsatta tester. Fortsatta tester inkluderade (i) varierande inkubationstider i orcein vid rumstemperatur samt vid 60°C, (ii) varierande koncentration av surgjord kaliumpermanganat samt varierande inkubationstid i orcein i rumstemperatur, (iii) jämförelse mellan orcein från två olika tillverkare (HistoLab och RAL-diagnostic), samt (iv) validering av metod med positivt kontrollmaterial, vid varierande inkubationstid i värme (60°C) och med orcein från annan tillverkare (HistoLab). Resultaten visade att elastiska fibrer och bakgrund färgades mer intensivt vid längre inkubationstid samt att värme minskar bakgrunden i tunntarm. Högre koncentrationer kaliumpermanganat påverkade inte resultatet märkbart förutom vid längre inkubationstid där bakgrunden blev svagare. Stor skillnad upptäcktes mellan olika tillverkare av orcein. Vid infärgning av lever syntes KAP först efter infärgning över natt med RAL-diagnostics orcein och efter enbart 30 minuter med HistoLabs orcein. Bakgrunden i lever är allmänt högre än i tunntarm. Den slutsats som drogs av arbetet är att elastiska fibrer lämpligast synliggörs vid lång inkubationstid i 60°C. KAP synliggörs med båda varianterna av orcein, vidare tester är däremot nödvändigt. / Cholestasis is a pathological condition where bile flow from the liver to the intestines is somehow obstructed. Obstruction can result from mechanical blockage of the ducts (called extrahepatic) or metabolic inhibition (called intrahepatic). During cholestasis copper associated protein accumulate in the liver. These proteins can be made visible with the use of orcein. Orcein is a histochemical stain that stain copper associated proteins and elastic fibres. The purpose of this thesis was to use established protocols to stain elastic fibres and to make know deviations from these protocols to studied orceins ability to stain these structures. Validation of the method shall be performed with known copper associated protein material, so that the method can be used in the long run for diagnostic use at the department of Clinical Pathology, Region Kalmar County. Initial tests were conducted to compare the different protocols. Based on the results further testing was done. These tests included variation in temperature, variation in incubation time in orcein, variation in potassium permanganate concentration and testing the outcome of orcein from different manufacturers (RAL-diagnostic and HistoLab). A validation was also conducted. The results showed that elastic fibres gained increased visibility with longer incubation time, higher temperatures increased visibility of elastic fibres even further and reduced background. Higher concentrations of potassium permanganate had limited effect, though it seemed to reduce background staining at longer incubations. Orcein from different manufacturers was also showed to preform very differently, with HistoLab giving best results. Copper associated proteins was visualised in liver with both types of orcein. The results showed a faster staning with orcein from HistoLab (30 min) than orcein from RAL-diagnostic (overnight). The conclusion is that elastic fibres is best visualised with orcein in 60°C and with longer incubation time. Visualisation of copper associated proteins can be done with orcein from both manufacturers, although further testing is required.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:lnu-88604 |
| Date | January 2019 |
| Creators | Jonnergård, Viktor |
| Publisher | Linnéuniversitetet, Institutionen för kemi och biomedicin (KOB) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0021 seconds