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Previous issue date: 2013-08-23 / FACEPE / O feijão-caupi (Vigna unguiculata) vem aumentando gradativamente seu potencial produtivo. Contudo, a área colhida, a produção e a produtividade oscilam muito em virtude das variações climáticas, bem como os ataques de pragas e patógenos. Estudos moleculares aliados a ferramentas biotecnológicas, como a transgenia e a mutagênese, podem contribuir na redução dos problemas gerados pelos estresses. O presente trabalho teve como objetivo inserir um gene ligado à defesa na cultivar BRS Tumucumaque de feijão-caupi, conferindo-lhe maior tolerância a estresses bióticos. Para obtenção dos resultados, foi utilizada a metodologia de transferência direta de genes via Biobalística. Foram bombardeados cerca de 700 embriões e cinco exemplares (0,7%) passaram por todas as etapas da pressão de seleção, chegando à aclimatação. Uma vez aclimatadas, realizou-se a análise por PCR. Para confirmação da transformação foi feito uso do conjunto de primers pAHAS 124/pAHAS 500. Os primersforam utilizados para amplificar uma sequência de 624 pb e, em conjunto com a sequência codificante, cerca de 750 pb. Em um segundo momento, também objetivou-se gerar mutantes com características de tolerância a estresse salino, fazendo uso da mutagênese in vitro através de irradiação por raios gama sobre o desenvolvimento in vitro da cv. BR14-Mulato.Inicialmente, foi estabelecido um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM, 258 mM, 344 mM e 0 mM, chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte. / Cowpea (Vigna unguiculata) is gradually increasing its productive potential. However, the harvested area, production and productivity of this crop oscillate due to climate changes, as well as attacks by pests and pathogens. Molecular studies aiming the isolation of genes combined with biotechnological tools, such as transgenesis and mutagenesis, can contribute effectively in reducing the problems caused by stress. The present work aimed to insert a defense gene in thecowpea cultivar BRS Tumucumaque,conferring increased tolerance to biotic stresses. To obtain these results, we used the methodology of direct gene transfer via biolistic. About 700 embryos were bombarded and five samples (0.7%) went through all the stages of selection pressure, reaching acclimation. Once acclimated, they were analyzed by PCR. For confirmation of the transformation a set of primers (AHAS124/pAHAS500) were used. In conjunction with the coding sequence, the pair showed a band of approximately 750 bp.In a second moment, was also aimed to generate mutants with characteristics of salt stress tolerance, making use of in vitro mutagenesis through gamma irradiation on the development in vitro of the cv. BR14-Mulato, from determining the minimum concentration of sodium chloride (NaCl) capable of inhibiting in vitro regeneration of tissues and subsequent choice of the radiation level capable of generating genetic variation.Initially, was established an appropriate protocol for selection pressure of the irradiated seeds, making use of concentrations of 172 mM, 258 mM, 344 mM and 0 mM, coming then to the conclusion that the concentration of 172 mM would be more appropriate. Finally, seeds were irradiated with three doses of gamma radiation (100 Gy, 150 Gy and 200 Gy), and their tissues were isolated and inoculated simultaneously in culture media with and without salt. As a result, were obtained a possible somaclonal variation arising from non-irradiated materials and inoculated onto non-selective medium, being transferred later to medium containing NaCl, surviving this. Another was the achievementof a mutant caused by the dose of 150 Gy, which originally formed embryogenic callus in the absence of NaCl and later placed under selection pressure in the next step.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25368 |
| Date | 23 August 2013 |
| Creators | AZEVEDO, Hayana Millena de Arruda |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/7796654028353519, BENKO-ISEPPON, Ana Maria, ARAGÃO, Francisco José Lima |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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