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Dissertacao - Mestrado em Biologia - ICB-UFG - Rodrigo Santos.pdf: 3002708 bytes, checksum: 4989a790c4cb26bc50f51abf0c8cfe16 (MD5)
Previous issue date: 2009-05-29 / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is a human pathogen with a wide distribution in
Latin America. The fungus causes paracoccidioidomycosis when mycelia reachs the lungs.
The success of the infection depends on the acquisition of essential micronutrients such as
copper, which is required as cofactor for a variety of enzymes important in biological in
several processes, such as respiration, growth and acquisition of iron. Previous studies, of the
Laboratory of Molecular Biology showed that a high affinity copper transporter (PbCTR3) is
a molecule highly expressed and probably necessary for the infection establishment of by P.
brasiliensis. In the present study were isolated and characterized the genomic and cDNA
sequences encoding for PbCTR3 of P. brasiliensis. The cDNA presented 582 base pairs and
encodes for a protein with 193 amino acids, predicted molecular mass of 21.5 kDa and pI of
8.6. The genomic sequence has four exons interrupted by three introns. In silico analysis was
performed on the database of the structural genome of P. brasiliensis
(http://www.broad.mit.edu/annotation/genome/paracoccidioides_brasiliensisMultiHome.html)
, where genes involved in maintaining the homeostasis of copper have been identified and
used to design of a model of copper homeostasis in P. brasiliensis. The transcriptional
behavior of Pbctr3 and genes involved in copper homeostasis were examined during exposure
of yeast cells of P. brasiliensis to copper and iron depletion conditions, by real time qRTPCR.
It was demonstrated a significant change in transcription lovel those of genes in the
absence of copper, as well as in the combined absence of both metals. qRT-PCR was used to
analyze the expression of Pbctr3 and Pbcrp (which encodes a protein responsive to copper)
in yeast cells of P. brasiliensis derived from infected lungs and spleen at different time points
of infection. The expression of Pbctr3 and Pbcrp was super-regulated during experimental
infection. Taken together, these data suggest the importance of PbCtr3 and of absorbing
copper / iron during the infectious process / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é um patógeno humano com ampla distribuição na
América Latina. O fungo causa a paracoccidioidomicose quando propágulos da fase miceliana
atingem os pulmões do hospedeiro. O sucesso da infecção depende da aquisição de
micronutrientes essenciais como o cobre, o qual é requerido como cofator por uma
diversidade de enzimas importantes em processos biológicos essenciais, tais como:
respiração, crescimento e aquisição de ferro. Estudos prévios, do Laboratório de Biologia
Molecular, demonstraram que um transportador de cobre de alta afinidade (PbCTR3) é uma
molécula altamente expressa e provavelmente necessária para o estabelecimento da infecção
por P. brasiliensis. No presente estudo foram isoladas e caracterizadas as seqüências
genômica e do cDNA que codificam para PbCTR3 de P. brasiliensis. O cDNA apresentou
582 pares de bases e codifica para uma proteína com 193 aminoácidos, massa molecular
predita de 21,5 kDa e pI de 8.6. A seqüência genômica apresenta quatro exons interrompidos
por três introns. Análises in silico foram realizadas no banco de dados do genoma estrutural
de P. brasiliensis (http:www.broad.mit.edu/annotation/genome/paracoccidioides_brasiliensis/
MultiHome.html), onde genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram
identificados e as seqüências utilizadas para a elaboração de um modelo de fatores envolvidos
na manutenção da homeostase de cobre por P.brasiliensis. O comportamento transcricional do
gene Pbctr3 e de genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram analisados
durante a exposição de células leveduriformes de P. brasiliensis em condições de depleção de
cobre e ferro por qRT-PCR em tempo real. Foi demonstrada uma alteração significativa no
nível de transcrição dos genes na ausência de cobre, assim como na ausência combinada dos
dois metais. qRT-PCR em tempo real foi utilizado para analisar a expressão de Pbctr3 e de
Pbcrp (que codifica uma proteína responsiva ao cobre) em células leveduriformes de P.
brasiliensis derivadas de pulmão e baço infectados, em diferentes tempos. A expressão de
Pbctr3 e Pbcrp foi super-regulada durante a infecção experimental. Tomados em conjunto,
esses dados sugerem a importância de Pbctr3 e do sistema de absorção cobre/ ferro durante o
processo infeccioso
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/1270 |
| Date | 29 May 2009 |
| Creators | SANTOS, Rodrigo da Silva |
| Contributors | SOARES, Célia Maria de Almeida |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Mestrado em Biologia, UFG, BR, Ciências Biolóicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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