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Deleção do gene PGI1 da levedura Pichia stiptis para aumentar o rendimento fermentativo a etanol.

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Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Nos últimos 15 anos, um grande esforço tem sido feito para uma maior utilização de
resíduos agroindustriais renováveis, podendo a biomassa lignocélulosica ser matéria
prima para os bicombustíveis. A composição dessas biomassas varia bastante, mas em
geral os substratos lignocelulósicos são constituídos de celulose (homopolímero de
glicose), hemicelulose (heteropolímero de hexoses e pentoses) e pela lignina
(compostos aromáticos). Considerando que a fermentação de glicose pode ser realizado
de forma eficiente, a bioconversão da fração das pentoses (xilose, principal açúcar
pentose obtido na hidrólise da hemicelulose), apresenta um desafio. A levedura Pichia
stipitis pode converter xilose a etanol com rendimentos industrialmente relevantes.
Porém necessita de condições limitantes de oxigênio, além do consumo da glicose inibir
de modo não competitivo a xilose e sob condições de crescimento similares o consumo
de glicose é maior que o de xilose. Com base na análise da via metabolica desta
levedura, o presente trabalho teve como objetivo redirecionar o fluxo metabólico da via
glicolitica para via das pentose fosfato dentro do que se chama modernamente de
Engeharia Metabólica. O gene PGI1 codificador da fosfoglicose isomerase foi
completamente removido do genoma da linhagem nativa NRRL 7124 com o uso de
fragmentos de PCR que continham seqüências com mais de 350 bp de homologia com
as regiões 5 e 3´ do gene alvo. Quando este gene foi deletado, a glicose-6-fosfato foi
inteiramente rotada para via da pentose fosfato. Este fluxo direciona a produção de
NADPH fundamental para a produção de precursores de nucleotídeos, aminoácidos, em
reações biossinteticas redutivas e também na conversão de xilose a xilitol. Para seleção
do transformante, foi necessária uma concentração de 1200μg/ml de Geneticina. Além
disso, a eficiência de transformação foi baixa, em parte devido à utilização do sistema
não convencional de códons por esta levedura. O cassete de deleção construído
apresenta a marca de seleção resistente a geneticina ladeado por duas regiões
denominadas loxp, que permitem a recombinação por sistemas de contra-seleção.
Possibilitando a remoção da marca de resistência

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2068
Date31 January 2011
CreatorsMIRANDA, André Ribas de
ContributorsMORAIS JÚNIOR, Marcos Antônio de
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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