Campylobacter is considered a fragile microorganism ans
sensitive to environmental conditions, but demostrate strategies to survive in
unfavorable environmental conditions. This study evaluated the viability and
production of transcipts of the genes sodB, p19 ciaB and dnaJ in strains ATCC
33291, NCTC 11351 and IAL 2383 stored in UHT milk and neopeptona + 12%
glycerol,whether or not subject to the pre-treatment temperature of 4°C or 10°C
for 30 minutes.Analyses were performed immediately after freezing in liquid
nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60 and 90 days at -20°C.The
viability was evaluated by traditional method of cultivation and production of
transcripts by RT-PCR technique. The quantification was only possible on the
first day of analysis (day 0) and had a mean of 3.0x107UFC and in the
remaining periods of storage strains showed confluent growth not allowing their
enumeration. The set of results has shown that the UHT milk was the most
appropriate for cryopreservation than the use of neopeptona +12% glycerol.
The pretreatment at 4°C for 30 minutes favored the production of transcripts for
ciaB and dnaJ genes. For the strains ATCC 33291 and NCTC 11351 was
verified a possible interconnection of sodB genes and p19, however, this link
was not observed for the strain IAL 2383, which also showed different behavior
from other strains for viability in both cryoprotectants and production of
transcripts. The results of this study show that when the maintenance of viability
of the strains is essential, it is necessary to use different combinations of
cryoprotectants / treatments to increase the chances of recovery and, when the
primary purpose is the production of transcripts, the option to maintain the
reliability of the results is the immediate extraction of DNA of isolated strains. / Campylobacter é considerado um microrganismo frágil e
sensível às condições ambientais, mas que demonstram possuir estratégias
para sobreviver em condições ambientais desfavoráveis. Este estudo avaliou a
viabilidade e produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em
cepas ATCC 33291, NCTC 11351 e IAL 2383 armazenadas em leite UHT
integral e neopeptona + glicerol 12%, submetidas ou não a pré-tratamentos à
temperatura de 4°C ou 10°C por 30 minutos. As análises foram realizadas
imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após
manutenção por 30, 60 e 90 dias a -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo
método tradicional de cultivo e a produção de transcritos pela técnica do RTPCR.
A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e
apresentaram média de 3,0 x 107 UFC, sendo que nos demais períodos de
armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente não permitindo
sua enumeração. O conjunto de resultados permitiu verificar que o leite UHT
integral foi mais adequado para a criopreservação que o uso da neopeptona +
glicerol 12%. O pré-tratamento a 4ºC por 30 minutos favoreceu a produção de
transcritos para os genes ciaB e dnaJ. Para as cepas ATCC 33291 e NCTC
11351 foi verificada uma possível interligação dos genes sodB e p19,
entretanto, esta ligação não foi observada para a cepa IAL 2383, que também
mostrou comportamento diferente das outras cepas quanto à viabilidade nos
dois crioprotetores e produção de transcritos. Os resultados obtidos neste
estudo permitem concluir que quando a manutenção da viabilidade das cepas é
essencial, faz-se necessário o uso das diferentes combinações
crioprotetor/tratamentos para aumentar as chances de recuperação e, quando
o objetivo principal é a produção de transcritos, a opção para manter a
fidedignidade dos resultados é a extração imediata do DNA das estirpes
isoladas. / Mestre em Ciências Veterinárias
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/13068 |
| Date | 22 March 2013 |
| Creators | Moura, Mariela Silva |
| Contributors | Rossi, Daise Aparecida, Rezende, Cíntia Silva Minafra e, Fonseca, Belchiolina Beatriz |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias, UFU, BR, Ciências Agrárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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