BEZERRA, Lady Clarissa Brito da Rocha. Prospecção de moléculas com potencial nutracêutico em sementes de enterolobium contortisiliquum (VELL.) morong.: purificação e caracterização parcial de três inibidores de quimotripsina. 2010. 97 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2010. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-06-01T12:44:59Z
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Previous issue date: 2010 / Leguminous seeds are main sources of food proteins for humans and animals. Other interests in these plant proteins concerning their nutraceutical properties have been raised, since many bioactive proteins, previously referred only as anti-nutritional factors, have exerted beneficial effects on health, acting as chemopreventive agents against several diseases. Among these are protease inhibitors, which play important roles in plant defense and have biological properties of interest for biotechnological applications in pharmaceutical and medical areas. This study aimed to evaluate the nutritional and nutraceutical potential of Enterolobium contortisiliquum seeds, focusing on the purification and partial characterization of chymotrypsin inhibitors and assess their antiproliferative effect against human tumor cells. E. contortisiliquum seeds are an excellent protein source, with about 50% of this macronutrient on a dry basis. The presence of protease inhibitors in high quantities suggests that these molecules may exert a nutraceutical application. Three chymotrypsin inhibitors, denominated EcCI1, EcCI2 and EcCTI were purified and partially characterized. EcCI1, EcCI2 and EcCTI show molecular weights of 17, 17 and 19 kDa, respectively. EcCI1 and EcCI2 are non-competitive inhibitors with ki of 4 x 10-8 and 2.5 x 10-8 M, respectively, while EcCTI inhibits chymotrypsin competitively with ki of 5 x 10-8 M. Only EcCTI was able to inhibit trypsin (98%). EcCI1 and EcCI2 successfully inhibited leukocyte elastase (about 70%), but EcCTI (20%). The three inhibitors slightly inhibited pancreatic elastase (about 20%) and none was able to inhibit papain. The three inhibitors have a high thermal stability (37 to 90 °C for EcCI2 and 37 to 100 °C for EcCI1 and EcCTI), pH (2 to 12) and DTT concentrations ranging from 1 to 100 mM for EcCI1 and EcCTI and from 1 to 10 mM for EcCI2. Further studies are needed to better characterize these inhibitors. None of the inhibitors promoted antiproliferative effect against four tumorigenic cell lines tested. / Sementes de leguminosas constituem uma das principais fontes de proteína na alimentação humana e animal. Outros interesses têm sido despertados para o potencial nutracêutico inerente a essas proteínas vegetais, uma vez que muitas proteínas bioativas, até então referidas apenas como fatores antinutricionais, têm exercido efeitos benéficos no organismo, atuando na cura e/ou prevenção de várias doenças. Dentre esses, destacam-se os inibidores de proteases, os quais desempenham importantes funções na defesa de plantas e apresentam propriedades biológicas de interesse para aplicações biotecnológicas nas áreas farmacológica e médica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial nutricional e nutracêutico de sementes de Enterolobium contortisiliquum, enfocando a purificação e caracterização parcial de inibidores de quimotripsina e avaliar seu efeito antiproliferativo contra células tumorigênicas humanas. As sementes de E. contortisiliquum são uma excelente fonte de proteínas, apresentando cerca de 50% desse macronutriente em base seca. A presença de inibidores de proteases em quantidades elevadas sugere que essas moléculas possam vir a ter uma aplicação nutracêutica. Dessa forma, foram purificados três inibidores de quimotripsina, denominados EcCI1, EcCI2 e EcCTI, os quais foram parcialmente caracterizados. As massas moleculares aparentes determinada para os três inibidores é de 17, 17 e 19 kDa, respectivamente. EcCI1 e EcCI2 são inibidores do tipo não competitivo e apresentam ki de 4 x 10-8 e 2,5 x 10-8 M, respectivamente. Em contrapartida, EcCTI inibe a quimotripsina de forma competitiva e apresenta ki de 5 x 10-8 M. Apenas EcCTI foi capaz de inibir a tripsina (98%). EcCI1 e EcCI2 inibiram satisfatoriamente a elastase neutrofílica (ca. de 70%), mas não EcCTI (20%). Os três inibidores inibiram sutilmente a elastase pancreática (ca. de 20%) e nenhum foi capaz de inibir a papaína. Os três inibidores são altamente estáveis às condições extremas de temperatura (de 37 a 90 °C para EcCI2 e de 37 a 100 °C para EcCI1 e EcCTI ), pH (2 a 12) e DTT nas concentrações de 1 a 100 mM para EcCI1 e EcCTI e de 1 a 10 mM para EcCI2. Outros estudos são necessários para melhor caracterizar esses inibidores. Nenhum dos inibidores promoveu efeito antiproliferativo contra as quatro linhagens de células tumorigênicas testadas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/18276 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Bezerra, Lady Clarissa Brito da Rocha |
| Contributors | Carvalho, Ana de Fátima Fontenele Urano |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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