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Previous issue date: 2014-07-26 / A ciclofosfamida (CF) é um agente antineoplásico e imunossupressor, usada no tratamento de diversos tipos de tumores e em algumas doenças auto-imunes. A CF é considerada um pró-fármaco, portanto, precisa sofrer biotransformação hepática para formar seus metabólitos ativos, como a mostarda fosforamida e a acroleína. Seu metabólito terapêutico, a mostarda fosforamida, é responsável pelo efeito citotóxico na célula tumoral, enquanto a acroleína é conhecida por apresentar um efeito tóxico secundário, por aumentar a produção de espécies reativas ao oxigênio, causando estresse oxidativo. Esse, por sua vez, poderia estar diretamente relacionado com a redução da fertilidade causada por esta droga. Diante disso, compostos naturais com atividade antioxidante poderiam ser uma alternativa ao dano causado pela CF. O chá verde, obtido da planta Camellia sinensis, tem ação antioxidante e scavenger de radicais livres, devido ao alto conteúdo de polifenóis. O presente estudo avalia o papel protetor da infusão do chá verde sobre o dano oxidativo no sistema reprodutor de camundongos machos, e a sua relação com a fertilidade, após uma administração aguda de CF. Os camundongos foram pré-tratados por gavagem com veículo ou chá verde diariamente, por 14 dias, na dose de 250 mg/kg. A CF foi administrada via intraperitoneal no 14o dia, 1 hora após a administração do chá, na dose de 100 mg/kg. Os camundongos foram eutanasiados 24 horas após a administração da CF, e os testículos e epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas e avaliação espermática. O conteúdo de catequinas, principais constituintes do chá verde foi avaliada por HPLC. Epigalocatequina galato (EGCG) está presente em alta concentração na nossa infusão (1340,2 μg/mL), seguido por epicatequina (EC-500,95 μg/mL) e epicatequina galato (ECG-302,84 μg/mL). CF causou estresse oxidativo no sistema reprodutor dos animais, evidenciado neste trabalho por danificar tanto lipídios, como proteínas e DNA. A CF causou um aumento na peroxidação lipídica (níveis de MDA), dano de DNA (ensaio cometa) e atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), enquanto diminuiu a atividade da glutationa peroxidase (GPx), glutationa-S-transferase (GST) e 17β–hidroxiesteróide desidrogenase (17β–HSD) em ambos os tecido testados. A atividade da enzima catalase (CAT) e a quantificação de proteína carbonil foram alteradas somente em testículo, mas não em epidídimo. Em relação à avaliação espermática, CF reduziu significativamente apenas a concentração de espermatozóides, comparado ao controle. O pré-tratamento com a infusão do chá verde reduziu significativamente a produção de MDA, carbonilação de proteína, dano de DNA e restaurou a atividade da GPx e GST. Em epidídimo, o chá verde também aumentou a concentração espermática e restaurou a atividade da enzima 17β–HSD. Pode-se concluir que a infusão do chá verde melhora o dano induzido pela CF, no sistema reprodutor de camundongos, e este efeito poderia ser atribuído ao alto conteúdo de catequinas presentes no chá e à sua atividade antioxidante. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent used to treat various types of tumors and in some autoimmune diseases. CP is considered a prodrug, therefore, must undergo hepatic biotransformation to form its active metabolites, such as phosphoramide mustard and acrolein. Its therapeutic metabolite, phosphoramide mustard, is responsible for the cytotoxic effect on tumor cells, while acrolein is known to provide a secondary toxic effect by increasing the reactive oxygen species production, causing oxidative stress. This might be directly related to the fertility reduction caused by this drug. Therefore, natural compounds with antioxidant activity could be an alternative to the damage caused by CP. Green tea, obtained from the plant Camellia sinensis, has antioxidant and free radical scavenging effect, due to the high content of polyphenols. The present study evaluates the protective role of the green tea infusion on oxidative damage on male mice reproductive system, and their relationship to fertility after an acute administration of CP. The mice were pre-treated by gavage with vehicle or green tea daily for 14 days at dose of 250 mg/kg. CP was administered intraperitoneally on day 14, 1 hour after administration of tea at dose of 100 mg/kg. Mice were euthanized 24 hours after the administration of the CP and testes and epididymis were removed for further biochemical analysis and sperm assessment. The content of catechins, the main constituents of green tea were evaluated by HPLC. Epigallocatechin gallate (EGCG) is present in high concentrations in our infusion (1340.2 μg/ml), followed by epicatechin (EC-500.95 μg/ml) and epicatechin gallate (ECG-302.84 μg/mL). CP caused oxidative stress in the reproductive system of animals, evidenced in this work by damaging not only lipids, but also proteins and DNA. CP increased lipid peroxidation (MDA), DNA damage (comet assay) and superoxide dismutase (SOD) activity, while decreased glutathione peroxidase (GPx), glutathione-S-transferase (GST) and 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) activity in both tissues tested. Catalase (CAT) activity and quantification of protein carbonyl were altered only in testes but not in the epididymis. Regarding sperm evaluation, CF significantly decreased only sperm concentration, compared to the control group. Pre-treatment with green tea infusion significantly reduced MDA production, protein carbonylation, DNA damage and restored GPx and GST activity. In epididymis, green tea also increased sperm concentration and restored 17 β-HSD activity. Green tea infusion improves the damage induced by CP in the reproductive system of mice, and this effect is attributed to the high content of catechins in tea and its antioxidant activity.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.1.0.46:riu/312 |
| Date | 26 July 2014 |
| Creators | Zanchi, Mariane Magalhães |
| Contributors | Cibin, Francielli Weber Santos |
| Publisher | Universidade Federal do Pampa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIPAMPA, instname:Universidade Federal do Pampa, instacron:UNIPAMPA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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