Le Ca[indice supérieur 2+] joue un rôle majeur dans la régulation de processus physiologiques et biochimiques de l'organisme. Chez les cellules non-excitables, les canaux TRPCs ("transient receptor potential canonical") sont impliqués dans l'influx de Ca[indice supérieur 2+] à travers la membrane plasmique. Au début de mes études graduées en 2002, les déterminants moléculaires qui permettent l'assemblage des canaux TRPC n'étaient pas connus.Le but de la présente étude est d'identifier ces déterminants moléculaires chez les TRPCs et de déterminer leur importance dans la tétramérisation du canal. Pour ce faire, nous avons utilisé l'approche des protéines chimériques. Nous avons utilisé TRPC4 et TRPC6 pour générer les protéines chimériques en échangeant les différents domaines de TRPC4 avec les mêmes régions dans TRPC6. Ces deux TRPCs appartiennent à des sous-familles différentes et par conséquent, ils ne forment pas de canaux ensemble. La première partie de l'étude démontre que TRPC4 co-immunoprécipite avec la chimère qui contient les domaines de l'ankyrine et du coiled-coil de TRPC4 introduits dans TRPC6. Ce premier domaine d'assemblage, nommé AD1, comprend donc le N-terminal de TRPC4. La méthode du GST pull-down a permis de diminuer AD1 à deux domaines d'interaction qui contiennent la troisième et quatrième répétition de l'ankyrine et une région en aval du domaine coiled-coil. Un deuxième domaine d'assemblage, nommé AD2, est composé de la région du pore et de la queue C-terminale. Enfin, le N-terminal de TRPC4 ou 6 interagit avec son propre C-terminal. Ainsi les résultats démontrent qu'il existe deux domaines d'assemblage, AD1 et AD2, chez les TRPCs. Dans la deuxième partie de l'étude, nous démontrons que le N-terminal de TRPC4 s'associe avec lui-même in cellulo pour former un tétramère. Cette association avec lui-même du N-terminal de TRPC4 se fait via le domaine de l'ankyrine et de la région en aval du domaine coiled-coil - les deux domaines d'interaction identifiés en N-terminal. Des expériences de GST pull-down, de double-hybride et de dichroïsme circulaire démontrent que ces deux domaines d'interaction s'associent avec eux-mêmes. Ces résultats suggèrent que cette association avec eux-mêmes des deux domaines d'interaction participe à l'assemblage du canal tétramérique. Cette étude a permis d'identifier deux domaines, AD1 et AD2, permettant l'assemblage des canaux TRPC et de caractériser comment AD1 permet la tétramérisation du N-terminal de TRPC4.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usherbrooke.ca/oai:savoirs.usherbrooke.ca:11143/4276 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Lepage, Pascale |
| Contributors | Boulay, Guylain |
| Publisher | Université de Sherbrooke |
| Source Sets | Université de Sherbrooke |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse |
| Rights | © Pascale Lepage |
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