Immunhistokemi (IHC) och immuncytokemi (ICC) är viktiga verktyg inom cancerdiagnostik för att fastställa diagnoser. Både histologiskt och cytologiskt material kan användas för immunokemisk analys men kräver olika förberedelser. Den preanalytiska fasen påverkar epitop och antigenens tillgänglighet samt immunoreaktivitet, vilket gör valet av pre- och postfixering och hur de påverkar cytologiskt material, viktiga att förstå. ICC tillämpas vanligen på cytologiskt material som preparerats enligt cellblockteknik (CBT) men ibland saknas extraherat material för analys. Antikroppar kan användas för att differentiera tumörursprung, tumörsubtyper och inflammatoriska tillstånd, vilket är avgörande för klinisk diagnostik och behandlingsbeslut för individen. Vid klinisk patologi och cytologi i Kalmar är ett återkommande problem bristen på cellmaterial för CBT-preparering vid punktionscytologi. Syftet med denna studie var att validera antikroppar (kalretinin, CD45, CK5, CK7, SOX-10, EpCAM och TTF-1) på cytologiskt material (pleuraexsudat från 10 patienter) som preparerats enligt ThinPrep™- metoden (TP-metoden). Studien syftade även till att undersöka effekterna av post-fixering i 4 % formalin, 96% etanol eller ingen post-fixering inför ICC-analys för att se om valet av post-fixeringsmedel påverkar antikropparnas färgningsmönster (nukleärt, cytoplasmatiskt eller membranöst). CD45, CK5, CK7 och TTF-1 kunde valideras i studien. Det fanns inte någon signifikant skillnad (p > 0,05) i bedömningskategorierna (bakgrund, inmärkning och cellantal) mellan olika post-fixeringsmedel. Det fanns heller inga indikationer som visade att en särskild post-fixering gynnande ett särskilt färgningsmönster. Fler studier behövs för att förstå den preanalytiska fasens påverkan på ICC- analys av cytologiskt material. I samband med punktionscytologi skulle preparering enligt TP-metoden säkerställa tillgången på cellmaterial för ICC-analys. / Immunohistochemistry (IHC) and immunocytochemistry (ICC) are crucial tools in cancer diagnostics for establishing diagnosis. Both histological and cytological materials can be used for immunochemical analysis, but they require different preparations. The pre-analytical phase affects the epitope and antigen availability as well as immunoreactivity, making the choice of pre- and post-fixation and their impact on cytological material important to understand. ICC is usually applied to cytological material prepared using the cell block technique (CBT), but sometimes there is a lack of extracted material for analysis. Antibodies can differentiate tumor origins, subtypes, and inflammatory conditions, which is essential for clinical diagnostics and treatment decisions. In clinical pathology and cytology in Kalmar, a recurring issue is the lack of cell material for CBT preparation in fine-needle aspiration cytology. This study aimed to validate antibodies (calretinin, CD45, CK5, CK7, SOX-10, EpCAM, and TTF-1) on cytological material (n=10 pleural effusions) prepared using the ThinPrep™ method (TP method). The study also aimed to study the effects of post-fixation in 4% formalin, 96% ethanol, or without fixation medium before ICC analysis to see if the choice of post-fixation medium affects the staining patterns of the antibodies (nuclear, cytoplasmic, or membranous). CD45, CK5, CK7, and TTF-1 were validated in the study. There was no significant difference (p > 0.05) in the assessment categories (background, staining, and cell count) between different post-fixation media. There were also no indications that a particular post-fixation medium favored a specific staining pattern. Further studies are needed to understand the pre-analytical phase's impact on ICC analysis of cytological material. In fine-needle aspiration cytology, preparation using the TP method would ensure the availability of cell material for ICC analysis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:lnu-130173 |
| Date | January 2024 |
| Creators | Rosén, Helena |
| Publisher | Linnéuniversitetet, Institutionen för kemi och biomedicin (KOB) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.002 seconds