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Previous issue date: 2011-08-16 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O triptofano é um aminoácido essencial e precursor da síntese de serotonina (5-HT).
Variações nos níveis plasmáticos de 5-HT estão relacionadas com alterações de
humor, ansiedade, depressão, sono, fadiga e supressão de apetite. Neste estudo foi
desenvolvido um método simples, rápido e sensível para a quantificação de
triptofano em plasma e que emprega a cromatografia líquida de alta eficiência
(CLAE) com detector diode array (DAD) no comprimento de onda fixo de 267 nm. A
separação foi realizada em coluna analítica ACE 5 C18 (150 mm x 4,6 mm de
diâmetro interno e tamanho da partícula de 5 µm), o tempo de corrida foi de 10 min.
A fase móvel foi constituída por solução de acetato de sódio 5 mM e acetonitrila
(92:8, v/v) e modo de eluição isocrática (1 mL min-1). A preparação da amostra
consistiu na desproteinização do plasma utilizando ácido perclórico 8%. O triptofano
foi caracterizado no tempo de retenção de 5 min. A especificidade foi monitorada
utilizando matrizes normais, lipêmicas e hemolizadas, não sendo observado nenhum
pico interferente no tempo de retenção do triptofano. A linearidade do método foi
detectada entre 0,5 a 30,0 µg mL-1 e os coeficientes de variação do teste de precisão
foram calculados intra e inter-dia para três concentrações (2,5; 5,0 e 15,0 µg mL-1)
apresentando variações de 0,26 a 1,30% (intra-dia) e 3,07 a 3,97% (inter-dia)
respectivamente. Exatidão e recuperação satisfatórias foram obtidas por este
método, além de utilizar pequenas quantidades de solvente orgânico, caracterizando
a técnica como eficiente e ecologicamente amigável. / Trytophan is an essential amino acid and a serotonin (5-HT) synthesis precursor.
Altered plasma levels of 5-HT are related to humor and behavioral alterations,
anxiety, depression, sleep, fatigue and appetite suppression. In this study, a simple,
fast, sensitive and specific high-performance liquid chromatography (HPLC) method
was developed for determination of tryptophan with diode array detection (DAD)
setting at programmed wavelength (λ = 267 nm). The separation was carried out on
an analytical column ACE 5 C18 (150 mm x 4.6 mm internal diameter, 5 μm particle
size) in less than 10 min. Mobile phase consisted of 5 mM sodium acetate and
acetonitrile (92:8, v/v), isocratically eluted (1 mL min-1). Sample preparation consisted
of plasma deproteinization with 8% perchloric acid solution. Tryptophan was
characterized by a retention time of 5 min. Specificity was monitored using lipemic
and hemolysate plasma samples and any peak was observed at the same retention
time of tryptophan. A linear range was detected from 0.5 to 30.0 µg mL-1 and
coefficients of variation calculated from intra and inter-day from 3 concentration (2.5;
5.0 e 15.0 µg mL-1) assays precision were 0.26 – 1.30% and 3.07 – 3.97%
respectively. Satisfactory accuracy and recovery were obtained by this method, and
use small amounts of organic solvent, characterizing the technique as an efficient
and eco-friendly.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/4941 |
| Date | 16 August 2011 |
| Creators | Pinhati, Renata Romanholi |
| Contributors | Raposo, Nádia Rezende Barbosa, Brandão, Marcos Antônio Fernandes, Brandão, Humberto de Mello |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Programa de Pós-graduação em Saúde Brasileira, UFJF, Brasil, Faculdade de Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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