Affibodymolekyler är små affinitetsproteiner (6.5 kDa) som föreslås kunna ersätta monoklonala antikroppar i terapeutiska tillämpningsområden, exempelvis i antikropp-läkemedelskonjugat (ADCs) som kan navigera sig fram till biomarkörer som är uttryckta på cancerceller. Affibody-läkemedelskonjugat (AffiDC) kan användas för att målsöka just sådana överuttryckta proteiner, samtidigt som de erbjuder goda egenskaper, såsom snabb transportering och spridning i kroppen, och effektiv penetrering genom tumörer. Dessa AffiDC:er skulle kunna användas inom riktad cancerterapi for de cancersjukdomar som fortfarande är i behov av cancerhämmande behandlingar, såsom urotelial cancer. Den här studien föreslog tillämpning av ABD-kopplade affibodymolekyler för att målsöka ett nytt målprotein som har visats vara överuttryckt i flera olika cancersjukdomar, exempelvis bröst-, pankreas- och urotelial cancer. Affibodykandidater mot målproteinet har valts ur ett rekombinant bibliotek med 1×1011 transformanter som uttrycks med hjälp av en så kallad metod med E. coli celldisplay där affibodymolekylen visas på cellens ytmembran. De slutliga kandidaterna var sedan identifierade och biokemiskt karaktäriserade i in vitro-studie på människoceller, som visade att två av kandidaterna verkade binda till cancercellinjerna BT-474 och MCF-7 med KD omkring 10 till 100 nM. / Affibody molecules are small affinity proteins (6.5 kDa) suggested to substitute monoclonal antibodies in therapeutic applications, e.g., antibody-drug conjugates (ADCs) targeting biomarker proteins expressed on cancer cells. An affibody-drug conjugate (AffiDC) could be used to target these types of overexpressed proteins on cancer cells while offering attractive properties, such as rapid transportation and distribution in the body, as well as efficient tumour penetration. These AffiDCs could be used as a targeted cancer therapy for cancers that are yet to be treatable and curable, like urothelial cancers. This study suggested the use of ABD-fused affibodies to target a novel cancer protein that has been shown to be overexpressed on cancer cells, including breast, pancreatic and urothelial cancer. Affibody candidates toward this novel target were selected from a recombinant library, of 1×1011 transformants, that is expressed using E. coli cell display system. The final candidates were subsequently biochemically characterized and assessed for affinity for the target. Three affibodies were finally identified and assessed in in vitro studies on mammalian cells, revealing two affibodies that appear to bind to the cell lines BT-474 and MCF-7 with KD ranging 10 to 100 nM.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-314587 |
| Date | January 2022 |
| Creators | Hedberg, Elin |
| Publisher | KTH, Proteinvetenskap |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-CBH-GRU ; 2022:196 |
Page generated in 0.0022 seconds