La capture d'oligonucléotides (ON) par les cellules eucaryotes, considérée comme une étape limitante de leur efficacité, implique leur endocytose. Plusieurs publications ont rapporté une capture sélective d'ON, suggérant l'intervention de récepteurs de transport. Ma thèse de doctorat a donc visé à rechercher et à caractériser d'éventuelles protéines réceptrices pour les ON qui pourraient faciliter leur endocytose. Nous avons choisi dans ce but la lignée d'hépatocarcinome différencié HepG2, où l'endocytose d'ON a été démontrée par d'autres auteurs.
J'ai d'abord développé une nouvelle méthode, le « ligand blotting », et identifié une protéine transmembranaire, qui lie spécifiquement les ON, et est partiellement exposée à la surface de la cellule, trois conditions nécessaires pour un candidat-récepteur. La purification de cette protéine a donc été entreprise et une séquence partielle a pu être obtenue, mais aucune homologie n'a été trouvée dans les banques de données et il n'a pas été possible de la cloner.
J'ai ensuite étudié les propriétés de l'endocytose d'ON à faible concentration, pour éviter la confusion avec l'endocytose non spécifique, appelée endocytose fluide. Dans ces conditions, l'endocytose est saturable en fonction de la concentration du traceur, atteint un plateau après environ deux heures de capture, et est sensible aux mêmes compétiteurs que la liaison d'ON à la protéine « réceptrice » identifiée en « ligand blotting ». Ces propriétés sont compatibles avec celles de l'endocytose par récepteurs. Toutefois, après intériorisation, l'ON se retrouve essentiellement à la périphérie des cellules et ne co-localise pas avec la transferrine et le dextran, marqueurs classiques des endosomes et s'accumule dans des structures denses qui ne sont pas des lysosomes.
Vers la fin de mon doctorat, j'ai mis en évidence, de manière tout à fait inattendue, que la présence de la protéine « réceptrice d'ON » est liée à une infection systématique de la lignée HepG2 par M. hyorhinis ; que cette protéine n'est autre que la protéine transmembranaire invariante (p70) de cette bactérie ; et que l'infection intentionnelle par M. hyorhinis d'une autre lignée cellulaire suffit à y augmenter fortement la capture d'ON.
En conclusion, je propose l'hypothèse que la capture d'ON reflète la phagocytose de M. hyorhinis ayant fixé l'ON, et discute la signification de ces observations pour la biologie de l'infection non conventionnelle par cette bactérie.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:BICfB/oai:ucl.ac.be:ETDUCL:BelnUcetd-02262003-093837 |
| Date | 04 October 2002 |
| Creators | de Diesbach, Philippe |
| Publisher | Universite catholique de Louvain |
| Source Sets | Bibliothèque interuniversitaire de la Communauté française de Belgique |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | text |
| Format | application/pdf, application/msword |
| Source | http://edoc.bib.ucl.ac.be:81/ETD-db/collection/available/BelnUcetd-02262003-093837/ |
| Rights | unrestricted, J'accepte que le texte de la thèse (ci-après l'oeuvre), sous réserves des parties couvertes par la confidentialité, soit publié dans le recueil électronique des thèses UCL. A cette fin, je donne licence à l'UCL : - le droit de fixer et de reproduire l'oeuvre sur support électronique : logiciel ETD - le droit de communiquer l'oeuvre au public Cette licence, gratuite et non exclusive, est valable pour toute la durée de la propriété littéraire et artistique, y compris ses éventuelles prolongations, et pour le monde entier. Je conserve tous les autres droits pour la reproduction et la communication de la thèse, ainsi que le droit de l'utiliser dans de futurs travaux. Je certifie avoir obtenu, conformément à la législation sur le droit d'auteur et aux exigences du droit à l'image, toutes les autorisations nécessaires à la reproduction dans ma thèse d'images, de textes, et/ou de toute oeuvre protégés par le droit d'auteur, et avoir obtenu les autorisations nécessaires à leur communication à des tiers. Au cas où un tiers est titulaire d'un droit de propriété intellectuelle sur tout ou partie de ma thèse, je certifie avoir obtenu son autorisation écrite pour l'exercice des droits mentionnés ci-dessus. |
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