Orientadora : Profª. Drª. Aline de Marco Viott / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 06/08/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Patologia animal / Resumo: A salmonelose tem sido o principal problema enfrentado na atividade avícola. Recentemente, tem sido observado a campo um aumento do isolamento da Salmonella enterica sorotipo Heidelberg. Esse trabalho testou o uso de uma vacina viva deletada para Salmonella Heidelberg e um probiótico contendo Bacillus subtilis, objetivando a diminuição da contaminação em aves, instalações e carcaças de frango de corte. As aves foram desafiadas experimentalmente com um inoculo contendo 6x107 UFC/ml de uma cepa selvagem de Salmonella Heidelberg e divididas em quatro tratamentos: controle (S); tratado com Bacillus subtillis (SP), tratado com vacina viva deletada (SV) e tratado com vacina e probiótico (SVP). A quantificação foi realizada através de suabe de arrasto da cama e pool de suabe de cloaca, ambos realizados aos 7,14,21,28,35,42 dias. Após o abate fragmentos de pele e peito foram coletados para avaliação qualitativa e quantitativa de Salmonella. O baço, fígado e coração foram coletados e submetidos a contagem e identificação de Salmonella. Fragmentos de jejuno foram processados para imunoistoquimica (IHQ) para contagem de linfócitos T na mucosa. Analise histológica foi realizada em amostras de fígado, baço, coração e intestino e as lesões quando presentes foram classificadas como ausentes, leve, moderada e acentuada. Cortes de jejuno foram submetidos a coloração de PAS para evidenciação e contagem das células caliciformes, e mensuração de criptas e vilosidades intestinais. A análise estatística foi feita através do teste de regressão das médias, que demonstrou variações significativas (P<0,05) no isolamento de Salmonella da cloaca, revelando uma redução linear da concentração bacteriana ao longo do experimento nos grupos SP, e SVP. Os grupos S e SV apresentaram um comportamento quadrático com inicio da redução da contagem na cloaca a partir dos dias 32,3 e 17,75 respectivamente. A contagem de colônias de Salmonella na maravalha nos grupos SV e SVP apresentou decréscimo significativo (P<0,05) ao longo do experimento. Os grupos S e SP apresentaram um comportamento quadrático com inicio da redução nos dias 20,9 e 18,4 respectivamente. Todos os tratamentos apresentaram redução significativa na contagem bacteriana na carcaça quando comparados ao grupo controle, mas não diferiram entre si estatisticamente. Nas amostras de vísceras não houve crescimento bacteriano. As vilosidades que tiveram as maiores mensurações foram as do grupo S e SP e o grupo SVP apresentou o pior resultado para altura de vilosidade. O grupo S apresentou a maior profundidade de cripta e o tratamento SV estatisticamente a pior, porem a relação vilo cripta foi maior nesse grupo. Na IHQ todos os tratamentos tiveram resultados superiores em relação ao grupo S na contagem de linfócitos T. Não foram observadas lesões microscópicas nas amostras de jejuno, ceco e vísceras analisadas. Os tratamentos utilizados promoveram uma redução na contagem de Salmonella nas amostras, e aumento na contagem de linfócitos T, indicando que essas ferramentas podem ser um importante aliado no controle da enfermidade. Em relação à integridade intestinal a vacina obteve o melhor resultado em relação vilo/cripta.
Palavras chave: Controle, Heildelberg, imunoistoquimica, isolamento, morfometria, quantificação bacteriana, Salmonella / Salmonellosis is the main problem in the poultry activity. Recently an increase of Salmonella enterica serovar Heidelberg isolation in the field has been observed. This study tested the use of deleted live vaccine for Salmonella Heidelberg and a probiotic containing Bacillus subtilis in order to decrease the contamination in chickens, avian installations and carcasses of broiler chickens. The birds were experimentally challenged with an inoculum containing 6x107 CFU / mL of a wild strain of Salmonella Heidelberg and divided into four treatments: control (S); treated with Bacillus subtilis (SP), treated with deleted live vaccine (SV) and treated with vaccine and probiotic (SVP). Quantification was performed by drag swabs and cloacal swab pool, both performed at 7,14,21,28,35,42 days. After slaughter fragments of breast skin were collected for qualitative and quantitative analysis of Salmonella. Parts of spleen, liver and heart were collected and subjected to Salmonella isolation and counting. Fragments of jejunum were processed for immunohistochemistry (IHC) for counting T lymphocytes in the mucosa. Histological analyzes were performed on samples of liver, spleen, heart and intestine and lesions when present were classified as absent, mild, moderate and severe. Sections of jejunum were stain with PAS for goblet cell count, and measurement of intestinal villi and crypts. Statistical analysis was performed using the regression toward the means, which showed significant variations (P <0.05) in the isolation of Salmonella from the cloaca. There were a linear reduction in bacterial concentration throughout the experiment in groups SP and SVP test. The S and SV groups showed a quadratic behavior with reduction in the cloaca counting at experimental days 32.3 and 17.75, respectively. The colony count of Salmonella on poultry manure in SV and SVP groups showed significant decrease (P <0.05) throughout the experiment. The S and SP groups showed a quadratic behavior with early reduction in days 20.9 and 18.4 respectively. Statistical analyzes were performed using regression of which showed significant variations (P <0.05) in the isolation of Salmonella from cloaca, revealing a decrease in bacterial concentration throughout the experiment in groups SP, SV and SVP. The colony count of Salmonella in shavings in all groups showed significant decrease (P <0.05) throughout the experiment. All treatments showed significant reduction in bacterial counts in the carcass compared to the control group but didn’t differ statistically. There wasn’t bacterial growth in viscera samples. The villi that had the highest measurements were those of S and SP group and SVP group showed the worst result for villus height. The S group showed larger crypt depth and treatment SV statistically the worst; however, villous crypt ratio was higher in this group. At IHC all treatments had superior results compared to the S group in the count of T lymphocytes. No microscopic lesions were observed in samples of jejunum, cecum and viscera analyzed. The treatments promoted a reduction in the count of Salmonella in samples, and increased number of T lymphocytes. These results indicate that these tools can be important controlling the disease. In the evaluations of intestinal integrity, vaccine achieved the best results in villus / crypt ratio.
Key Word: Control, Heildelberg, immunohistochemistry, isolation, morphometry, bacterial quantification, Salmonella
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/37367 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Brazil, Thiago Vinholi |
| Contributors | Viott, Aline de Marco, Universidade Federal do Paraná. Setor Palotina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 60f. : il. algumas color., tabs., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
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