Orientadora : Profª Drª Juliana Bello Baron Maurer / Co-orientadora : Profª Drª Fabíola Regina Stevan Hancke / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 29/06/2011 / Inclui referências / Resumo: A Uncaria tomentosa (Willd.) D.C., popularmente conhecida como unha-de-gato, e uma planta medicinal da Amazonia empregada no tratamento de varias doencas por possuir potentes atividades anti-inflamatorias e imunoestimulantes. O objetivo desse estudo foi analisar quimicamente duas fracoes aquosas obtidas a partir de dois diferentes extratos comerciais, os quais correspondem as principais formas de utilizacao dessa planta: decocto (fracao D10a) e capsulas fitoterapicas (1AERT). As analises quimicas demonstraram a presenca de compostos fenolicos (86% para D10a e 42% para 1AERT) e componentes glicidicos (45% para D10a e 28% para 1AERT), um baixo teor de proteinas (<10%), bem como a ausencia de alcaloides (<0,01%) nessas fracoes. Entre os componentes glicidicos, 0,3% correspondem a arabinogalactanas-proteinas (AGPs) e 6% sao acucares acidos na fracao D10a, enquanto na 1AERT os teores desses compostos correspondem a 23 e 26%, respectivamente para D10a e 1AERT. Atraves da composicao monossacaridica observou-se que a fracao D10a e constituida principalmente de Rha (28%) e Glc (56%), e a 1AERT por Rha (8%), Ara (11%), Gal (23%) e Glc (26%). A atividade biologica dessas fracoes foi avaliada in vitro atraves do efeito exercido sobre cultura de macrofagos peritoneais de camundongos e sobre o sistema complemento humano. As fracoes nao foram citotoxicas para os macrofagos nas concentracoes de 0,32-320 ƒÊg/m., em 48h de tratamento. Somente a fracao 1AERT foi capaz de estimular a producao de NO apos 48h de tratamento, exercendo um aumento de 50% na concentracao de 320 ƒÊg/m.. Em relacao a producao de citocinas, as fracoes apresentaram atividades semelhantes em diferentes intensidades apos incubacao de 24h. Na concentracao de 320 ƒÊg/m., a fracao D10a aumentou a producao de TNF-ƒ¿ em 125% e de IL-6 em 1233%, e reduziu a producao de IL-1ƒÀ em 85%. Ja a fracao 1AERT, na mesma concentracao, aumentou a producao de TNF-ƒ¿ em 230% e de IL-6 em 664%, e reduziu a producao de IL-1ƒÀ em 61%. Ambas as fracoes nao exerceram efeito sobre a producao de IL-10. A atividade imunoestimulante em macrofagos pode ser observada tambem, apos 24 h de tratamento, atraves do teste de retencao do corante vermelho neutro, que demonstrou a capacidade das fracoes em estimular a fagocitose em macrofagos, e atraves da analise morfologica das celulas, que apresentaram morfologia tipica de macrofagos ativados. Alem disso, as fracoes foram avaliadas quanto a capacidade de modulacao do sistema complemento atraves do ensaio hemolitico, sendo caracterizadas como ativadoras do complemento atraves da via classica. A fracao D10a foi capaz de modular o sistema complemento atraves da via alternativa, enquanto a fracao 1AERT apresentou efeitos pouco expressivos atraves dessa via. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que as fracoes testadas podem ser classificadas como modificadoras da resposta biologica, e que ambas apresentaram as atividades imunoestimulantes e anti-inflamatorias descritas para U. tomentosa. As diferencas nas atividades observadas para cada fracao estao relacionadas com a diferenca na composicao quimica, levando a conclusao de que a mistura de compostos bioativos e importante para a atividade apresentada por essa planta, e que a sua forma de utilizacao (decocto ou capsulas fitoterapicas) interfere na atividade biologica encontrada. / Abstract: Uncaria tomentosa (Willd.) D.C., a medicinal plant from the Amazon basin, popularly known as gCat's claw h, has been widely used for its anti-inflammatory and immune-stimulant activities. In this study, two aqueous fractions, obtained from two different commercially available extracts, were chemically analyzed. These two fractions represent the major use forms of U. tomentosa: by decoction (fraction D10a) and phytotherapic capsules (1AERT). The chemical analysis demonstrated the presence of phenolic compounds (86% for D10a and 42% for 1AERT), carbohydrate compounds (45% for D10a and 28% for 1AERT), a low protein content (<10%), and absence of alkaloids (<0.01%) in those fractions. Among the carbohydrate compounds, 0.3% were arabinogalactan-proteins (AGPs) and 6 % were acidic sugars in fraction D10a, while AGPs were 23% and acidic sugars were 26% of the carbohydrate compounds in fraction 1AERT. Analysis of the monosaccharide content showed that fraction D10a consisted of Rha (28%) and Glc (56%), mainly, while fraction 1AERT consisted of Rha (8%), Ara (11%), Gal (23%) and Glc (26%). The biological activity of the fractions was evaluated in vitro through the analysis of their effect on culture cells of mouse peritoneal macrophages and on human complement system, as well. The fractions showed no cytotoxicity on the macrophages, when used in the 0.32-320 ƒÊg/m. range, for 48 hours. Fraction 1AERT was able to stimulate NO production, after 48 hours of treatment, enhancing NO production by 50%, when used at 320 ƒÊg/m.. No difference, towards cytokines production, was observed for both fractions, after incubation for 24h. Fraction D10a, at 320 ƒÊg/m., increased TNF-ƒ¿ production in 125%, and IL-6 production in 1233%, while reducing IL-1ƒÀ production in 85%. Fraction 1AERT, also at 320 ƒÊg/m., increased TNF-ƒ¿ production in 230%, and IL-6 production in 664%, while reducing IL-1ƒÀ production in 61%. None of the fractions had any effect on IL-10 production. After a 24 hours treatment, morphological analysis of the cells and the neutral red retention assay demonstrated the immune-stimulant activity of both fractions. Tests accessing the immune-stimulant activity of D10a and 1AERT fractions, showed increased phagocitosis and the typical morphology of activated macrophages in macrophages cultivated in the presence of both fractions. In addition, the fractions were evaluated for their ability to modulate the complement system, through the hemolytic assay. Results from these assays characterized both fractions as activators of the complement system through the classical pathway. Fraction D10a was able to modulate the complement system through the alternative pathway, while fraction 1AERT showed modest effects through the alternative pathway. From these results, it can be concluded that both fractions can be classified as modifiers of the biological response and presented the immune-stimulant and anti-inflammatory activities described for U. tomentosa. Differences in the observed activities for each fraction are related to differences in chemical composition, which leads to the conclusion that the mixture of the bioactive compounds is important for the activity showed by the plant. In addition, it can be concluded that the way the plant is used (decoction or phytotherapic capsules) interferes with the biological activity found.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/48429 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Lenzi, Raquely Moreira, 1986- |
| Contributors | Hancke, Fabíola Regina Stevan, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica), Maurer, Juliana Bello Baron |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 163 f. : il. [algumas color.] ; 30 cm., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
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