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Previous issue date: 2000-12-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Linhagens de soja triplo nulas (desprovidas das lipoxigenases da semente) foram comparadas com as variedades comerciais elite que lhe deram origem quanto à capacidade de nodulação e fixação de nitrogênio. Os resultados indicaram que as isoenzimas de lipoxigenases das sementes não são fatores determinantes na formação de nódulos e na fixação de nitrogênio. Utilizando-se as linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, foram avaliados os valores de K M app , atividade e "immunoblotting" de lipoxigenases em raízes coletadas a 0, 2, 6, 10, 15 e 25 dias após emergência e em nódulos coletados a 10, 15 e 25 dias após emergência. Os valores de K M app para raiz e para nódulo de Doko normal e Doko triplo nula indicaram que a eliminação genética das lipoxigenases das sementes não afetou a expressão das lipoxigenases nestes órgãos. Os valores de K M app para nódulo sugerem que o "pool" de lipoxigenases expresso neste órgão é o mesmo nestas duas linhagens no período estudado. A atividade de lipoxigenases nas raízes das linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, declinou com o passar do tempo. A maior atividade de lipoxigenases no início de formação de raiz, sugere o envolvimento desta enzima no crescimento e desenvolvimento deste órgão. Contudo, para nódulo ocorreu um aumento acentuado na atividade de lipoxigenase aos 25 dias após emergência, em um estádio de desenvolvimento no qual tem-se baixa taxa de crescimento e alta taxa de fixação de nitrogênio, sugerindo que lipoxigenase expressa no nódulo estaria envolvida com o armazenamento de nitrogênio. Dois grupos de mobilidade com aproximadamente 94 e 97 KDa foram encontrados nos "immunoblottings" para lipoxigenases de raiz e de nódulo. A intensidade das bandas imuno-reativas em raiz e em nódulo confirmaram os resultados obtidos com atividade de lipoxigenase, sugerindo que as variações de atividade desta enzima nestes órgãos são, principalmente, devido às variações no teor desta enzima. Utilizando-se dois "primers" específicos para amplificar prováveis fragmentos de PCR de lipoxigenase, a partir de cDNA de nódulo e de raiz de plantas de soja da variedade Doko, obteve-se uma amplificação diferencial, indicando a expressão de, pelo menos, uma forma distinta de lipoxigenase na raiz, não expressa no nódulo. Um fragmento de PCR proveniente de cDNA do nódulo foi clonado e seq ü enciado. A seq ü ência de aminoácidos deste clone, revelou ser proveniente de um novo membro da família multigênica de lipoxigenase de soja, com possível envolvimento no armazenamento temporário de nitrogênio. / Soybean lines lacking seed lipoxygenases (triple null) were compared with the elite commercial varieties that originated them in relation to nodulation capacity and nitrogen fixation. The results indicate that seeds lipoxygenases isozymes are not decisive factors for nodulation and nitrogen fixation. Doko and Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, were used. The lipoxygenases values of KM app , activity and immunoblotting from roots collected 0, 2, 6, 10, 15 and 25 days after emergency and from nodules collected 10, 15 and 25 days after emergency were measured. The KM app values of root and nodule Doko and Doko triple null lines indicated that the genetic elimination of seed lipoxygenases did not affect the lipoxygenases expression in this organ. The nodule KM app values suggest that the lipoxygenases pool expressed in this organ is the same in these two lines during the studied period. The root lipoxygenases activity of Doko and Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, reduced with time. The largest lipoxygenases activity observed at the beginning of root formation suggests the involvement of this enzyme in growth and development of this organ. However, for nodules it was noticed an accentuated increase of lipoxygenase activity at 25 days after plant emergency. At this development stage the nodule has slow growth's rate and high nitrogen fixation rate, suggesting that this lipoxygenase could be involved with storage of nitrogen. Root and nodule showed, at least, two mobility groups for lipoxygenases in immunoblottings, with approximately 94 and 97 KDa. The root and nodule immunoreactive bands intensity confirmed the results obtained with lipoxygenase activity, suggesting that activity changes in these organs are mainly due to variations in enzyme concentrations. Two specific primers were used to amplify possible lipoxygenase DNA fragments from nodule and root cDNAs of Doko variety. It was observed a differential amplification in these two organs. At xleast a major form of lipoxygenase expressed in the root was not expressed in the nodule. A PCR fragment from nodule with approximately 400 bp was cloned and sequenced, resulting in a 353 bp sequence. The amino acids derived sequence of this cDNA clone, GmLOXN, where compared with others in the GenBank revealing to be a new form of lipoxygenase gene with possible role in temporary nitrogen storage. / Tese importada do Alexandria
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/10715 |
| Date | 12 December 2000 |
| Creators | Junghans, Tatiana Góes |
| Contributors | Oliveira, Maria Goreti de Almeida, Mosquim, Paulo Roberto, Barros, Everaldo Gonçalves de, Moreira, Maurílio Alves |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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