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Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPQ / Mastitis adversely affects milk production and in general cows do not regain their full production levels post recovery, leading to considerable economic losses. Moreover the percentage decrease in milk production depends on the specific pathogen that caused the infection and enterobacteria are responsible for this greater reduction. These microorganisms are preferentially found in the habitat of animals in places contaminated with feces, urine, clay and also organic beds. Phenotypic tests are among the currently available methods used worldwide to identify enterobacteria; however they tend to misdiagnose the species despite the multiple tests carried out and they can delay the antibiotic therapy by clinic veterinary. On the other hand the MALDI-TOF MS technique has been attracting attention for its precise identification of several microorganisms at species level. In the current study, 183 enterobacteria were detected in milk (n=47) and fecal samples (n=94) collected from cows; also water (n=23) and milk line samples (n=19) collected from a farm in Rio de Janeiro with the purpose to present the MALDI-TOF MS technique as efficient methodology and also as a ?gold standard? to better understand the possible current biochemical errors in enterobacteria identification considering isolates from bovine environments. This proteomic technique confirmed 92.9% (170/183) of the enterobacteria species identified by biochemical tests that showed high sensitivity (> 81%) and specificity (> 89%). The gyrB sequencing was made in eigth from thirteen misidentified enterobacteria and confirmed 100% the MALDI-TOF results, so the proteomic technique was used as a ?gold standard? for this study. The amino acid decarboxylation test made the most misidentifications and Enterobacter spp was the largest misidentified genus (76.9%, 10/13). E.coli was prevalent (83%, 152/183) in all samples and the bovine milk presented the most enterobacteria diversity. The Salmonella sp wasn?t detected in feces bovine samples and all water samples from different points in the farm presented unacceptable microbiological standards. Was identified enterobacteria in milkers hands and nasal cavity also in the milking machines used on the property. These results aim to contribute significantly to the characterization of the Enterobacteriaceae as well in understanding of its spread in dairy production environment , assisting in need diagnostic of possible agents involved in bovine mastitis as well as to implement properly targeted prophylactic measures. / A mastite bovina afeta negativamente a produ??o de leite dificultando a recupera??o dos n?veis de produ??o total das propriedades leiteiras, levando a perdas econ?micas consider?veis. Esta redu??o no percentual da produ??o de leite pode estar associada ao agente patog?nico espec?fico que causou a infec??o, sendo as enterobact?rias frequentemente respons?veis pela mastite ambiental. Estes microrganismos s?o preferencialmente encontrados no habitat normal dos animais como locais que apresentam esterco, urina, barro e camas org?nicas. Os testes fenot?picos est?o entre os m?todos dispon?veis atualmente utilizados para identificar as enterobact?rias; no entanto, eles podem ocasionalmente identitificar erroneamente algumas esp?cies apesar dos m?ltiplos ensaios realizados. Al?m disso, a demora na sua execu??o pode tardar a antibioticoterapia realizada em campo. Por outro lado, a t?cnica de MALDI-TOF MS tem atra?do a aten??o pela sua identifica??o precisa dos v?rios microorganismos em n?vel de esp?cie. No presente estudo, um total de 183 enterobact?rias foram isoladas a partir de amostras de leite (n=47) e fezes colhidas de vacas em lacta??o (n=94); amostras de ?gua (n=23) e na linha de ordenha (n=19) em uma propriedade situada no Rio de Janeiro. A proposta foi utilizar a t?cnica de MALDI-TOF MS como um m?todo eficaz de identifica??o bacteriana de enterobact?rias e descrever a permanencia destes microrganismos no ambiente de produ??o leiteira. A t?cnica prote?mica confirmou 92,9% (170/183) das esp?cies de enterobact?rias identificadas pelos testes bioqu?micos convencionais. O sequenciamento do gene gyrB, realizado em oito das 13 enterobact?rias que apresentaram identifica??o discordante, confirmou em 100% o resultado da t?cnica prote?mica, que foi utilizada como metodologia de refer?ncia no presente estudo. O g?nero Enterobacter foi o mais discordante pelo m?todo bioqu?mico (76,9%, 9/13). A E.coli foi a esp?cie predominante (83%, 152/183) em todas as amostras avaliadas, sendo que o leite bovino apresentou maior diversidade de enterobact?rias. N?o foi detectada a presen?a de Salmonella spp. nas amostras de fezes bovinas e todas as amostras de ?gua dos diferentes pontos de coleta da propriedade apresentaram padr?es microbiol?gicos inaceit?veis. Foram isoladas enterobact?rias das m?os e cavidades nasal dos ordenhadores, bem como nas ordenhadeiras mec?nicas utilizadas na propriedade. Estes dados visam contribuir de forma significativa para a caracteriza??o das enterobacterias bem como para a compreens?o e sua descri??o no ambiente de produ??o leiteira, auxiliando no diagn?stico preciso dos poss?veis agentes envolvidos na mastite bovina bem como na implementa??o de medidas profil?ticas devidamente direcionadas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:jspui/1213 |
| Date | 26 February 2016 |
| Creators | Rodrigues, Naiara de Miranda Bento |
| Contributors | Coelho, Shana de Mattos de Oliveira, Souza, Miliane Moreira Soares de, Moreira, Beatriz Meurer, Santos, Huarrisson Azevedo |
| Publisher | Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Veterin?rias, UFRRJ, Brasil, Instituto de Veterin?ria |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ, instname:Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, instacron:UFRRJ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 7 REFER?NCIAS BIBLIOGRAFICAS AL-HOLY, M.A.; LIN, M.; ABU-GHOUSH, M.M.; AL-QADIRI, H.M.; RASCO, B.A. Thermal resistance, survival and inactivation of Enterobacter sakazakii (Cronobacter spp.) in powdered and reconstituted infant formula. J Food Safety, v.29, p.287-301. 2009. ALTSCHUL, S.F.; MADDEN, T.L.; SCHAFFER, A.A.; ZHANG, J.; ZHANG, Z.; MILLER, W.; LIPMAN, D.J. Gapped BLAST and PSI-BLAST: A new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Research, v.25, p.3389-3402, 1997. ANHALT, J.P.; FENSELAU, C. Identification of bacteria usingmass spectrometry. Anal Chem, v.47, p. 219?225, 1975. BARREIRO, J.R. Identifica??o de pat?genos causadores de mastite subcl?nica por espectrometria de massas. (Disserta??o de Doutorado). Universidade de S?o Paulo. 2010. BECKER, K.; HARMSEN, D.; MELLMANN, A.; MEIER, C.; SCHUMANN, P.; PETERS, G.; VON EIFF, C. 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