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Previous issue date: 2016-06-24 / Introduction: Candida spp are opportunistic pathogens isolated from human biota in the gastrointestinal tract, oral and vaginal mucosa, which can lead to the development of superficial lesions to disseminated infections, especially in immunosuppression. The high toxicity, the high cost of treatment and the emergence of resistant strains justify the search for new therapeutic agents. The plant biodiversity is rich in active ingredients that have contributed to the development of new and effective drugs, less expensive treatments and population access. Cymbopogon nardus (L.) Rendle is a plant popularly known as citronella and cultivated in subtropical and tropical areas of Asia, Africa and America, including Brazil. Essential oils present in the Cymbopogon genus plants have been widely studied, but there are few studies involving chemical analysis and microbiological ethanol extract of C. nardus. Objective: The objective of this study was to evaluate the antifungal potential, in vitro, of ethanol extract (EE) and essential oil (EO) from the leaves of Cymbopogon nardus (L.) Rendle (citronella) clinical isolates against of Candida spp. Material and Methods: In this study the species Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida parapsilosis sensu stricto and C. orthopsilosis were selected. EE was obtained by extraction ultrasonic bath and analyzed by ultra-performance liquid chromatography (UPLC-ESI-QTOF-MS). The EO was extracted by hydrodistillation and analyzed by gas chromatography-mass spectrometer (GC-MS). The antifungal activity of EE and EO was performed by determination of the minimum inhibitory concentration (MIC), time-kill assay inhibition of hyphal growth of C. albicans and inhibit mature biofilm. Additionally, the cytotoxic evaluation (determination of IC50) was assessed in HepG-2 cell lines (hepatic) and MRC-5 (fibroblast). Results: The results of the chemical analysis of EE showed presence of glycosylated flavones and glycosylated phenylpropanoids. According to the EO chemical analysis, the main compounds observed were monoterpenes containing-oxygen: citronellal, geranial, geraniol, citronellol and neral. Biological assays showed effective antifungal activity of EE (MIC 1000 to 125 μg / ml) and of EO (MIC 1000 the 250 μg/ml). In the time-kill assay was observed inhibition of growth of the species tested for EE and EO. The hyphal growth of C. albicans was inhibited by EE (1000 to 31 μg/ml) and the EO (1000 to 15.8 μg/ml) for 12 and 24 hours. The EE and EO inhibit mature biofilm species C. albicans, C. krusei, and C. parapsilosis at concentrations of 50xCIM and 10xCIM, respectively. EE exhibited the lower IC50 values for HepG-2 (322 μg/ml) and MRC-5 (181.1 μg/ml) than essential oil that showed IC50 values for HepG-2 (96.6 μg/ml) and MRC-5 (33.1 μg/ml). Conclusions: The EE and EO from C. nardus present as a promising source of new molecules with antifungal activity especially to the inhibition of the main virulence factors such as formation of hyphae and biofilm. / Introdução: Leveduras do gênero Candida são patógenos oportunistas isolados da biota humana no trato gastrointestinal, mucosa oral e vaginal, que podem levar ao desenvolvimento de lesões superficiais até infecções disseminadas, especialmente em situações de imunossupressão. O alto custo para tratamento de infecções, a elevada toxicidade, e o surgimento de cepas resistentes justificam a busca de novos agentes terapêuticos. A biodiversidade vegetal é rica em princípios ativos que têm contribuído com o desenvolvimento de novos e efetivos medicamentos, mais econômicos e de fácil acesso populacional. Cymbopogon nardus (L.) Rendle, é uma planta popularmente conhecida como citronela e cultivada em áreas subtropicais e tropicais da Ásia, África e América, incluindo o Brasil. Os óleos essenciais presentes em plantas do gênero Cymbopogon têm sido amplamente estudados, porém, a analise química e microbiológica do extrato etanólico de C. Nardus,é pouco explorada Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antifúngico, in vitro, do extrato etanólico (EE) e do óleo essencial (OE) das folhas de Cymbopogon nardus (L.) Rendle (citronela) frente isolados clínicos de Candida spp. Material e Métodos: Foram consideradas as espécies: Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida parapsilosis sensu stricto e C. orthopsilosis. O EE foi obtido por extração em banho ultrassônico e analisado por cromatografia liquida de ultra performance (UPLC-ESI-QTOF-MS). O OE foi extraído por hidrodestilação e analisado por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa (CG-EM). A atividade antifúngica do EE e do OE foi realizada através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), ensaio time-kill, inibição do crescimento hifal de C. albicans e inibição de biofilme maduro. Adicionalmente, a avaliação citotóxica (determinação de IC50) foi estabelecida em linhagens celulares HepG-2 (hepática) e MRC-5 (fibroblasto). Resultados: Os resultados da análise química do EE evidenciaram presença de flavonas e fenilpropanoides glicosilados. De acordo com a análise química do OE, os principais compostos observados foram monoterpenos contendo oxigênio: citronelal, geranial, geraniol, citronelol e neral. Os ensaios biológicos mostraram importante atividade antifúngica para o EE (CIM de 1000 a 125 μg/mL) e, para o OE (CIM de 1000 a 250 μg/mL). A inibição do crescimento ocorreu para todas as espécies avaliadas frente aos produtos, EE e OE. O EE (1000 até 31 μg/mL) e OE (1000 até 15,8 μg/mL) inibiram o desenvolvimento da hifa de C. albicans, durante 12 e 24 horas, além de inibir o biofilme maduro das espécies de C. albicans, C. krusei e C. parapsilosis, nas concentrações de 50xCIM e 10xCIM, respectivamente. O EE apresentou os menores valores de IC50 para HepG-2 (322 μg/mL) e MRC-5 (181,1 μg/mL) em comparação com o óleo essencial - IC50 para HepG-2 (96,6 μg/mL) e MRC-5 (33,1 μg/mL). Conclusões: O EE e OE de C. nardus apresentam-se como uma fonte promissora de novas moléculas com atividade antifúngica com destaque à inibição dos principais fatores de virulência: formação de hifa e biofilme.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/403 |
| Date | 24 June 2016 |
| Creators | Toledo, Luciani Gaspar de |
| Contributors | Almeida, Margarete Teresa Gottardo de, Bauab, Tais Maria, Nogueira, Mara Corrêa Lelles |
| Publisher | Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, FAMERP, Brasil, Faculdade 1::Departamento 1 |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da FAMERP, instname:Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, instacron:FAMERP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -6954410853678806574, 500, 500, 600, 306626487509624506, 8765449414823306929 |
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