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Previous issue date: 2009-06-29 / In Brazil, the snake Crotalus durissus collilineatus is much studied, particularly its
component crotoxina. The crotoxina is the most toxic component of venom from the
species cascavéis amicanas Crotalus durissus. It is composed of two different subunits, the
crotapotina (acid component) and a phospholipase A2 (basic component). The enzyme
phospholipase A2 is the most studied of these poisons, being largely responsible for its
toxicity. Its main effects are neurotoxicity, myotoxicity, cytotoxicity, platelet aggregation,
anti-coagulant and bactericide. This study aims to purify and characterize a new
phospholipase A2 isolated from Crotalus durissus collilineatus, and uses it as a model for
studies of compounds with potential antinflamatório. Samples (5mg) of crude venom of
Crotalus durissus collilineatus were applied on a C18 column coupled to a system
semipreparativa HPLC. 20 peaks were obtained for proteins / peptides, and the increased
activity of fofolipase (PLA) was detected in fraction 14. This fraction was subjected to a
new phase chromatography on C18 analytical column, resulting in the isolation of a new
PLA. By electrophoresis, SDS-PAGE the enzyme showed high degree of purity, with
molecular mass around 13 kDa. The PLA2 activity showed optimal at pH of 8.2 and at
temperatures between 35-40 º C and remains stable up to temperatures of 60 º C.
According to our experiments isolated PLA was inhibited Ca2 +, and activity was not
changed by Cu2 +. Manaca extract, ellagic acid and quercetin strongly inhibited the PLA,
showing that this enzyme has potential for the selection of compounds with potential antiinflammatory. / No Brasil, a serpente Crotalus durissus collilineatus é muito estudada, devido a sua
importância médica, já que é uma das responsáveis pelo envenenamento crotálico. A
crotoxina é o componente mais tóxico do veneno das cascavéis sulamericanas da espécie
Crotalus durissus. É composta por duas diferentes subunidades, a crotapotina (componente
ácido) e uma fosfolipase A2 (componente básico). As fosfolipases A2 é a enzima mais
estudada destes venenos, sendo a maior responsável por sua toxicidade. Dentre seus
principais efeitos estão os efeitos neurotóxico, miotóxico, citotóxico, agregação
plaquetária, anti-coagulante e bactericída. Este estudo tem como objetivo caracterizar uma
nova fosfolipase A2 isolada de Crotalus durissus collilineatus, e utilizá-la como modelo
para estudos de compostos com potencial antinflamatório. Amostras do veneno bruto de
Crotalus durissus collilineatus foram aplicados em uma coluna C18 semipreparativa
acoplada a um sistema HPLC. Foram obtidas 20 picos de proteínas/peptídios, sendo que a
maior atividade de fofolipase (PLA) foi detectada na fração 14. Esta fração foi submetida
a uma nova etapa cromatográfica, em coluna C18 analítica, resultando no isolamento de
uma nova PLA. Através de eletroforese, SDS-PAGE a enzima apresentou alto grau de
pureza, com massa molecular em torno de 13 kDa. A PLA2 apresentou atividade ótima em
pH de 8,2 e temperatura entre 35-40 ºC, e se mantendo estável em temperaturas de até 60
ºC. De acordo com nossos experimentos a PLA isolada foi inibida Ca2+, e a atividade não
foi alterada por Cu2+. Extrato de manacá, ácido elágico e quercetina inibiram fortemente a
PLA, mostrando que esta enzima tem potencial para a seleção de compostos com potencial
antiinflamatório.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/1293 |
| Date | 29 June 2009 |
| Creators | SANTANA, Pedro Henrique Camargo |
| Contributors | ULHOA, Cirano Jose |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Mestrado em Biologia, UFG, BR, Ciências Biolóicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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