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Previous issue date: 2008-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The knowledge about immunology of Leishmania (Viannia) braziliensis-murine
infection is poorly known, especially concerning innate immune response and the
involvement of leukotrienes in the resistance mechanisms. Leukotrienes are lipid mediators
of inflammation that activate microbicidal mechanisms in leukocytes. The present study
aimed to evaluate the BALB/c and C57Bl/6 murine infection with two L. (V.) braziliensis
isolates obtained from cutaneous leishmaniasis patients and the involvement of
leukotrienes in the resistance of infection. Thus, IMG3 and RPL5 isolates were identified
as L. (V.) braziliensis by using molecular techniques and the in vitro growth of parasites in
Grace´s medium (26°C) was evaluated. The time course of lesion after footpad infection
was followed in BALB/c and C57Bl/6 mice. C57Bl/6 mice genetically deficient in
interferon gamma (IFNγ) were infected to evaluate the relevance of this cytokine in
resistance. The parasite burden in draining lymph nodes and spleens was detected by
limiting dilution assay. BALB/c- and C57Bl/6-infected footpads were processed after 12
weeks of infection and those from IFNγ-defecient mice after 4 weeks for histopathological
analyses. Tissue sections were stained by hematoxylin-eosin. Parasite capacity to induce
nitric oxide (NO) was analyzed in RAW 264.7 cell cultures treated or not with IFNγ and
lipopolysaccharide (LPS). Nitrites were detected by using Griess reaction. The NO
modulation by endogenous leukotrienes was evaluated through treatment of the cultures
with a 5-lipoxygenase (5-LO) inhibitor and a leukotriene B4 (LTB4) antagonist.
Macrophage leishmanicidal activity against IMG3 isolate was evaluated in thioglycolateelicited
peritoneal macrophages of C57Bl/6 mice. In these cultures, NO was inhibited by
aminoguanidine. In vivo leukotriene inhibition was achieved by using a 5-LO inhibitor. In
vitro-parasite growth profiles were similar and parasites at the 5th day of culture were used
to infection. The lesion course was also similar between isolates in both two mouse stains
used, but C57Bl/6 mice presented healing after 12 weeks of infection whereas in BALB/c
mice the lesion was persistent. In IFNγ-deficient mice there progressive lesions and
visceralization in IMG3- as well as in RPL5-infected mice. Corroborating these data, the
parasite burden in draining lymph nodes of BALB/c mice was higher than in C57Bl/6
mice after 12 weeks of infection with IMG3, and parasites (IMG3 and RPL5) were
identified in about 50% of the IFNγ-deficient mouse spleens. The histopathological
analyses showed an intense dermal infiltrate with vacuolated macrophages heavily
parasitized in BALB/c mice (12 weeks) an in IFNγ-deficient mice (4 weeks), but not in
C57Bl/6 mice (12 weeks), similarly for IMG3 and RPL5. Both isolates IMG3 an RPL5
induced NO production in RAW 264.7 celll cultures presenting synergism with IFNγ.
Endogenous leukotrienes did not affect NO production in these cultures. C57Bl/6
peritoneal macrophages activated with IFNγ/LPS killed IMG3 parasites depending on NO
release. In vivo inhibition of leukotriene synthesis did not change the course of infection in
C57Bl/6 mice infected with IMG3 isolate. The relevant findings are: BALB/c mouse is
susceptible to infection with IMG3 an RPL5 isolates whereas C57Bl/6 is resistant; IFNγ is
crucial to the control of the infection; the isolates induce NO and this molecule contributes
to macrophage leishmanicidal activity; and also the data suggest that endogenous
leukotrienes are not involved in the control of L. (V.) braziliensis in C576Bl/6 mouse. / A imunologia da infecção murina por Leishmaia (Viannia) braziliensis é pouco
conhecida, especialmente considerando a imunidade inata e a participação dos leucotrienos
nos mecanismos de resistência à infecção. Os leucotrienos são mediadores lipídicos da
inflamação que ativam mecanismos microbicidas dos leucócitos. O presente trabalho teve
como objetivo avaliar o perfil da infecção de camundongos BALB/c e C57Bl/6 por dois
isolados de L. (V.) braziliensis obtidos de pacientes com leishmaniose cutânea e o
envolvimento dos leucotrienos endógenos na resistência à infecção. Para isto, os isolados
denominados IMG3 e RPL5 foram identificados como L. (V.) braziliensis por meio de
técnicas moleculares e foram avaliados quanto ao crescimento in vitro em meio Grace
(26°C), e quanto ao curso da evolução da lesão, em camundongos BALB/c e em C57Bl/6.
Camundongos C57Bl/6 geneticamente deficientes em interferon gama (IFNγ) foram
infectados para avaliar a importância desta citocina no controle da infecção. A carga
parasitária foi obtida pelo ensaio da diluição limitante em linfonodos drenantes da lesão e
nos baços. As patas dos camundongos BALB/c e C57Bl/6 foram colhidas após 12 semanas
de infecção, e dos camundongos deficientes em IFNγ, na 4ª semana, e foram processadas
para análises hitopatológicas. A capacidade de indução de óxido nítrico (NO) pelos
isolados foi avaliada em culturas de células RAW 264.7 tratadas ou não com IFNγ e
lipopolissacarídeo (LPS), sendo os nitritos detectados por reação de Griess. A regulação
da produção de NO pelos leucotrienos endógenos foi avaliada por tratamento das culturas
de macrófagos com um inibidor de 5-lipoxigenase (5-LO) e um antagonista de receptor de
leucotrieno B4 (LTB4). A atividade microbicida dos macrófagos foi avaliada em
macrófagos peritoneais (C57Bl/6) infectados com o isolado IMG3, sendo o NO inibido por
aminoguanidina. O efeito da inibição de leucotrienos, in vivo, foi avaliado em
camundongos C57Bl/6 infectados com o isolado IMG3 e tratados com um inibidor de 5-
LO. As curvas de crescimento in vitro foram similares para os dois isolados e os parasitos
no 5° dia de cultivo foram usados nos experimentos de infecção. O curso da lesão foi
similar entre os dois isolados nos camundongos BALB/c e C57Bl/6, porém enquanto a
lesão regrediu nos C57Bl/6, nos camundongos BALB/c, a lesão foi persistente até a 12ª
semana de infecção. Em camundongos deficientes em IFNγ houve crescimento progressivo
das lesões e visceralização, tanto com o isolado IMG3 quanto com o RPL5. Confirmando
estes dados, a carga parasitária nos linfonodos drenantes da lesão nos camundongos
BALB/c foi maior do que a encontrada nos C57Bl/6 após 12 semanas de infecção com
IMG3 e os parasitos (IMG3 e RPL5) foram encontrados em cerca de 50% dos baços dos
camundongos deficientes em IFNγ. As análises histopatológicas mostraram um acentuado
infiltrado inflamatório na derme, com macrófagos vacuolizados repletos de parasitos nos
camundongos BALB/c (12 semanas), e nos deficientes de IFNγ (4 semanas), mas não nos
camundongos C57Bl/6 (12 semanas), similarmente para IMG3 e RPL5. Os isolados
IMG3 e RPL5 induziram NO em células RAW 264.7 em sinergismo com IFNγ e os
leucotrienos endógenos não alteraram a produção de NO destas células. Macrófagos
peritoneais murinos mostraram atividade microbicida de maneira dependente de NO. A
inibição in vivo da síntese de leucotrienos não alterou o curso da infecção pelo isolado
IMG3 em camundongos C57Bl/6. Coletivamente, os dados mostram que o camundongo
BALB/c é suscetível à infecção pelos dois isolados, enquanto o C57Bl/6 é resistente; o
IFNγ é essencial para o controle da infecção; os isolados induzem a produção de NO, o
qual contribui para a eliminação dos parasitos; e os dados sugerem que os leucotrienos
endógenos não estão envolvidos nos mecanismos de resistência dos camundongos C57Bl/6
a L. (V.) braziliensis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/4187 |
| Date | 14 March 2008 |
| Creators | Bastos, Rosidete Pereira |
| Contributors | Dias, Fátima Ribeiro, Dorta, Miriam Leandro |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 5989919188376747614, -2555911436985713659 |
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