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Previous issue date: 2014 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Leishmania amazonensis é um dos principais agentes etiológicos em um amplo espectro de formas clínicas da Leishmaniose Tegumentar Americana. De modo geral, a resistência frente às leishmanioses decorre do desenvolvimento de uma resposta imune celular eficiente, porém
muitos estudos têm demonstrado que citocinas específicas ou combinações de citocinas
podem ser fatores de resistência ou suscetibilidade à infecção por L. amazonensis. Estudos recentes sugerem a participação das células de Langerhans (LCs) nas resposta anti-Leishmania, porém os mecanismos envolvidos durante esta interação são ainda pouco estudados. Objetivos: Estudar o papel do TNF-α e anti-CD40 nas interações in vitro entre as LCs e L. amazonensis, observando o perfil de citocinas produzidas e a expressão de moléculas
de superfície, bem como verificar a capacidade destas células em ativar a produção de IFN-γ e
IL-4 por células do linfonodo. Metodologia: As LCs foram isoladas da epiderme de
camundongos BALB/c e incubadas com promastigotas de L. amazonensis, TNF-α e/ou anti-
CD40. Após 24h, as LCs foram co-cultivadas com células obtidas de linfonodos por 72h. As
citocinas IL-6, IL-12, IFN-γ e IL-4 foram dosadas por ensaio imunoenzimático (ELISA) e as
moléculas de superfície foram analisadas por citometria de fluxo. Resultados: Os níveis de IL-
6 e IL-12p70 produzidos pela LCs foram significativamente reduzidos após interação com L.
amazonensis, mesmo após o tratamento das LCs com TNF-α ou anti-CD40. Em relação às
moléculas de superfície, não houve diferença na expressão de CD207 em nenhum dos grupos,
porém a presença de L. amazonensis promoveu uma redução significativa na expressão de
CD40 nas LCs tratadas com TNF-α ou anti-CD40, e aumentou a expressão de CD86 em todos
os grupos. Na presença de L. amazonensis, as células do linfonodo apresentaram uma
produção diminuída de IFN-γ e não houve alteração na produção de IL-4. Quando cocultivadas
com LCs estimuladas previamente com L. amazonensis, a produção de IFN-γ
também foi reduzida, mesmo na presença dos estímulos TNF-α e/ou anti-CD40. Não foram
observadas alterações significativas na produção de IL-4 pelas células do linfonodo cocultivadas
nas mesmas condições experimentais. Conclusão: L. (L.) amazonensis exerce um
efeito imunomodulador sobre a resposta imune mediada por LCs, inibindo a produção de IL-6
e IL-12p70 e expressão de CD40, além de impedir a ativação da produção de IFN-γ por
células do linfonodo co-cultivadas com LCs, mesmo após tratamento com TNF-α e anticorpo
anti-CD40. / Leishmania amazonensis is one of the agents in a wide spectrum of clinical forms of
cutaneous leishmaniasis. In general, the resistance against leishmaniasis depends on the
development of an efficient immune response, however many studies have demonstrated that
specific cytokines or combinations of cytokines may be factors of resistance or susceptibility
to infection by L. amazonensis. Recent studies suggest the involvement of Langerhans cells
(LCs) in the anti-Leishmania response, but the mechanisms involved in this interaction are
still poorly understood. In this study, we investigated the role of TNF-α and anti-CD40 in L.
amazonensis interaction with LCs in vitro, showing de profile of cytokines produced and the
expression of surface molecules, besides verifing their abilities to activate the production of
IFN-γ e IL-4 by lymph node cells. Methods: Fresh immature LCs, highly purified from
BALB/c mouse skin, were incubated with L. amazonensis promastigotes, TNF-α and/or anti-
CD40 mAb. After 24 h, LCs were co-cultured with lymph nodes cells of BALB/c mice for
additional 72h. Culture supernatants were tested for IL-6, IL-12p70, IFN-γ and IL-4 by
ELISA, while surface molecules were analyzed by FACS. Results: The levels of IL-6 and IL-
12p70 produced by LCs were significantly reduced after interaction with L. amazonensis,
even after treatment of LCs with TNF-α or anti-CD40. Regarding surface molecules, there
was no difference in the expression of CD207 in both groups, but the presence of L.
amazonensis promoted a significant reduction in the expression of CD40 on LCs treated with
TNF-α or anti-CD40, and increased expression CD86 in all groups. Lymph node cells showed
a decreased production of IFN-γ in the presence of L. amazonensis and no change in IL-4.
When co-cultured with LCs previously stimulated with L. amazonensis, the production of
IFN-γ was also reduced, even in the presence of TNF-α and/or anti-CD40. No significant
changes were observed in IL-4 by lymph cells co-cultured under the same experimental
conditions. Conclusion: L. (L.) amazonensis exert an immunomodulatory effect on the
immune response mediated by LCs by: 1) inhibiting the production of IL-6 and IL-12p70; 2)
decreasing CD40 expression and; 3) preventing the activation of IFN-γ production by lymph
node cells co-cultured with LCs, even after treatment with TNF-α and anti-CD40 antibody.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpa.br:2011/5838 |
| Date | 27 June 2014 |
| Creators | CAMPELO, Simone Rodrigues |
| Contributors | SALGADO, Claudio Guedes |
| Publisher | Universidade Federal do Pará, Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular, UFPA, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPA, instname:Universidade Federal do Pará, instacron:UFPA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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