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Previous issue date: 2014 / FACEPE / A troponina T (TnT) é um marcador cardíaco considerado "padrão ouro" para o diagnóstico
do infarto agudo do miocárdio, devido a sua alta sensibilidade e especificidade. Métodos
analíticos para melhorar o diagnóstico desta doença são importantes para o tratamento
adequado dos pacientes. Atualmente, as técnicas baseadas em imunoensaios são as mais
utilizadas para diagnóstico clínico e determinação da TnT à beira do leito.
Entretanto, apresentam algumas limitações como procedimentos complicados para análise e
um elevado tempo de espera do resultado. Neste contexto, os imunossensores
surgem como uma atrativa ferramenta, de baixo custo, com alta sensibilidade e especificidade
para determinação da TnT. Nesta tese, dois diferentes imunossensores eletroquímicos foram
desenvolvidos para a detecção da TnT em soro humano. O primeiro imunossensor foi
baseado em um método simples de amino-funcionalização de nanotubos de carbono
empregado para promover uma imobilização dos anticorpos anti-TnT através de sua região Fc
e sua ligação orientada ao antígeno TnT. Os nanotubos de carbono de múltiplas paredes foram
amino-funcionalizados utilizando o reagente etilenodiamina e os ensaios foram realizados
através de um estudo fatorial associado com uma matriz de Doehlert. As modificações
estruturais dos nanotubos de carbono foram confirmadas através da espectroscopia de
infravermelho por transformada de Fourrier. Para detecção eletroquímica deste imunossensor,
eletrodos impressos descartáveis de carbono foram utilizados e então modificados com estes
nanotubos de carbono amino-funcionalizados. Um imunoensaio tipo "sanduíche" foi
realizado, no qual a captura específica da TnT foi avaliada através das reações redox da
enzima peroxidase conjugada ao segundo anticorpo anti-TnT. Sob condições experimentais
otimizadas, uma curva de calibração para as diferentes concentrações de TnT foi obtida com
faixa linear de resposta entre 0,02 e 0,32 ng mL-1 (r=0,985, n=5, p<0.001) e um limite de
detecção de 0,016 ng mL-1. O segundo imunossensor foi baseado na formação de um filme
polimérico sobre um eletrodo de carbono vítreo para imobilização de anticorpos anti-TnT. O
ácido orto-aminobenzóico (o-ABA) foi eletropolimerizado sobre a superfície do eletrodo e
empregado para fornecer grupamentos carboxílicos à superfície e permitir a ligação covalente
de anticorpos anti-TnT. O eletrodo apresentou-se estável mantendo 91,6% da sua resposta
inicial após 18 dias e apresentou um limite de detecção de 0,015 ng mL-1 de TnT. Os
imunossensores desenvolvidos foram sensíveis, permitindo medidas confiáveis da TnT para o
diagnóstico do infarto agudo do miocárdio na clínica médica.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/12163 |
| Date | 31 January 2014 |
| Creators | Freitas, Tatianny de Assis |
| Contributors | Dutra, Rosa Amália Fireman |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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