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Previous issue date: 2014 / Enzimas fibrinolíticas têm recebido atenção, devido ao seu potencial medicinal para doenças
trombolíticas, estas estão se tornando uma das principais causas de morbidade e mortalidade em
todo o mundo. Este trabalho teve como finalidade obter condições de produção e caracterização de
proteases fibrinolítica, produzida por fungos filamentosos isolados de solo da Caatinga-PE-Brasil,
utilizando fermentação em estado sólido, e purificar essa enzima utilizando Sistema de Duas Fases
Aquosas. Dentre os fungos estudados, foi selecionado o Mucor subtillissimus SIS42 como melhor
produtor da protease e entre os resíduos agroindustriais utilizados, o melhor substrato foi o farelo de
trigo. Através de um planejamento fatorial 23 as condições otimizadas de produção foram: 3g de
farelo de trigo, 50% de umidade, submetidos a 25ºC após 72 horas de fermentação, com uma
atividade fibrinolítica e proteásica de 144,58 U/mL e 48,33 U/mL, respectivamente. A protease
fibrinolítica contida no extrato bruto apresentou uma temperatura ótima de 45ºC e foi estável nesta
temperatura por 150 minutos, a mesma teve sua atividade proteásica aumentada na presença de K+,
Ca+ e Mn+ e diminuída na adição de Cu+. De acordo com a especificidade a substratos
cromogênicos e a presença de PMSF, esta enzima foi classificada como uma serino protease do tipo
quimiotrispsina. A partir dos resultados obtidos, foi realizado um planejamento experimental (23)
para purificação da protease fibrinolítica produzido pelo M. subtillissimus SIS42 utilizando o
sistema de duas fases aquosas, onde foi possível avaliar a influência das variáveis: concentração e
massa molar do PEG e concentração de sulfato de sódio na purificação da enzima. Três variáveisrespostas
foram avaliadas (coeficiente de partição, recuperação da enzima e fator de purificação).
Utilizando um planejamento central composto para ampliar os estudos e efeitos na purificação da
enzima, foram estudadas as variáveis: concentração de PEG (6000 g/mol) e sulfato de sódio. Os
resultados atingidos foram: coeficiente de partição para a fase rica em sal (0,049 a 0,795), um
aumento de pureza de 10 com uma recuperação de 102% da atividade enzimática na fase inferior do
sistema. O sistema que proporcionou as melhores condições de purificação foi constituído por: PEG
6000 (g/mol) e concentração de 30,00% (m/m) com uma concentração de sulfato de sódio de
13,20% (m/m). A protease fibrinolítica apresentou através de uma SDS-PAGE uma massa massa
molar após a purificação de 94kDa e atividade no zimograma de fibrina. Após a purificação, por
sistema de duas fases aquosas a protease fibrinolítica foi novamente avaliada a presença de PMSF e
a substratos cromogênicos, indicando a enzima como uma quimiotripsina.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/12311 |
| Date | 31 January 2014 |
| Creators | Nascimento, Thiago Pajeú |
| Contributors | Porto, Ana Lúcia Figueiredo, Porto, Tatiana Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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