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Previous issue date: 2015-02-25 / O infarto agudo do miocárdio (IAM) representa hoje um dos maiores problemas de
saúde mundial prevalecendo sobre doenças como câncer, AIDS e doenças
respiratórias. Em virtude da relevância, métodos cada vez mais eficientes para auxilio
no diagnóstico do IAM vem sendo desenvolvidos. Um destes métodos, os
aptassensores, chegam como ferramenta analítica alternativa para detecção de
marcadores de necrose miocárdica. Neste trabalho um aptassensor simples e livre de
marcação foi desenvolvido para detecção de troponina T cardíaca (cTnT), para isto,
nanopartículas de prata foram sintetizadas eletroquimicamente sobre eletrodos
impressos de tinta de carbono. Em seguida, 5 μL de cisteína foi adicionada à
superfície sensora com intuito de servir de braço químico e possibilitar a imobilização
do aptâmero. O aptâmero usado consiste em DNA fita simples modificado com grupos
amino (NH2-ssDNA) e específico para o analito em questão. As condições ideais para
imobilização do aptâmero e reconhecimento da molécula alvo, assim como a
caracterização eletroquímica do aptassensor, foram investigados através das técnicas
de voltametria cíclica (CV) e voltametria de pulso diferencial (DPV). A especificidade
do aptassensor foi investigada utilizando para isso moléculas alvo específicas e
inespecíficas. O reconhecimento do alvo apresentou alta sensibilidade com limite de
detecção em 0,1 ng mL−1 de cTnT e uma boa reprodutibilidade (CV = 4%). O sensor
também foi testado com amostras de soro humano, apresentando ótima concordância
(95% de nível de confiança) com o padrão ouro, o método ECLIA. Neste trabalho
pôde-se constatar que as nanopartículas de prata incorporadas a superfície eletródica
melhoraram a reprodutibilidade, a condutividade e, consequentemente a resposta
sensora, enquanto os aptâmeros asseguraram a sensibilidade e especificidade do
aptasensor, apresentando, este modelo, grande potencial para uso no monitoramento
dos níveis séricos de troponina cardíaca. / Acute myocardial infarction (AMI) it is one of the most serious diseases in the
world responsible for approximately 17 million of deaths in 2012. Therefore, early
diagnosis and prompt medical response are of paramount importance for patient
survival. Aptasensors can be an alternative, which in combination with electrochemical
techniques can provide the simplicity and speed required. A simple and sensitive
label-free aptasensor for cardiac troponin T (cTnT) detection was successfully
developed. For this purpose, it was chosen a DNA aptamers modified with amino
group (NH2-ssDNA) specific to bind cTnT with a high specificity and stability. Herein,
silver nanoparticles electrochemically synthesized and cysteine were used to modify
the electrode, providing binding sites for aptamer immobilization. The optimum
conditions for immobilization of the aptamer and target recognition were investigated
by cyclic voltammetry (CV) and differential pulse voltammetry (DPV) technique. The
aptasensor achieved a low limit of detection (0.3 ng mL−1) and a linear range between
0.1 and 10 ng mL−1 cTnT, significant for acute myocardial infarction diagnosis. Good
reproducibility was obtained by the proposed aptasensor supported by a coefficient of
variation of 4%. The silver nanoparticles incorporated to the electrode surface
improved the reproducibility, while the aptamer secured the sensitivity of the
biosensor. The sensor was also tested for human serum samples presenting a good
agreement with the ECLIA methods at 95% confident level. This point-of-care
approach presents a great potential for use in several situations releasing the
aptasensor for use in the cardiac troponin detection.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/16727 |
| Date | 25 February 2015 |
| Creators | GOMES FILHO, Sérgio Luiz da Rocha |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/6466300269003304, CARVALHO JÚNIOR, Luiz Bezerra de, DUTRA, Rosa Amália Fireman |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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