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Previous issue date: 2005 / Purificação de formas moleculares múltiplas da lectina de sementes de
Capparis yco (CySeL) foi desenvolvida através de fracionamento com sulfato de
amônio e cromatografia das frações (F) em CM-Celulose. O protocolo foi efetivo
para obter, a partir das F20-40 e F40-80, CySeL1 (12 mg) e CySeL2 (9 mg),
respectivamente; adicionalmente revelou diferenças nas propriedades de cargas das
isoformas. Cromatografia em coluna de Hitrap SP, não foi eficiente na separação das
isoformas. CySeL1 e CySeL2 foram inespecíficas para eritrócitos humanos e elevadas
atividades hemaglutinantes específicas (AHE) foram detectadas com células de
coelho. AH de CySeL1 foi inibida com monossacarídeos e glicoproteínas, enquanto
CySeL2 reconheceu somente glicoproteínas. Cromatografia de afinidade em coluna
de fetuína-agarose mostrou que a AH da F20-40 foi mais retida do que a AH da F40-
80. O valor de pH e a presença de íons interferiram diferentemente na AH das
isoformas; somente CySeL2 permaneceu ativa em pH 10 e foi estimulada por 40 mM
de Ca2+ e Mg2+. CySeL1 e CySeL2 apresentaram o mesmo padrão eletroforético. Em
PAGE sob condições nativas, três bandas protéicas que foram extraídas do gel
mostraram AH; SDS-PAGE na presença de β-mercaptoetanol revelou dois
polipeptídeos de Mr 15 e 14 kDa. Coloração do gel para carboidratos mostrou a
natureza glicoprotéica da subunidade de 14 kDa. Quantidades miligramas de
isoformas da lectina de sementes de C. yco foram obtidas. As diferenças estruturais
de CySeL1 e CySeL2 detectadas na cromatografia em CM-Celulose, inibição da AH
com monossacarídeos e efeito do pH e ions na AH associado ao elevado rendimento da purificação das proteínas, indicam a potencial utilização de CySeL1 e CySeL2 em
investigações estruturais e de aplicação biotecnológica.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1946 |
| Date | January 2005 |
| Creators | Cleriane Pereira Rabêlo, Clébia |
| Contributors | Maria Guedes Paiva, Patrícia |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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