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Previous issue date: 2006 / As lectinas são proteínas ubíquas na natureza que se ligam reversívelmente a mono, oligo,
polissacarídeos e glicoconjugados. Não apresentam atividade catalítica e ao contrário dos
anticorpos, não são produtos de uma resposta imunológica. O objetivo do presente trabalho
foi avaliar a extração e a reextração de uma lectina purificada por cromatografia de troca
iônica (CrataBL) e do extrato bruto (EB) da entrecasca de Crataeva tapia utilizando o
sistema de micelas invertidas, constituídas pelo surfactante dioctilsulfosuccinato de sódio
(AOT) em isooctano. A entrecasca de Crataeva tapia foi coletada na região da cidade do
Recife (Pernambuco, Brasil) e o extrato [10 % (p/v) em 150 mM NaCl] foi obtido por
trituração e agitação durante 16 h a 4 oC, filtrado em gaze e centrifugado (4.000 x g durante
15 min). O sobrenadante obtido foi denominado de extrato bruto (EB). Os fatores que
afetam a extração da proteína tais como: tempo de contato de agitação (5 - 20 min), força
iônica, incluindo o tipo de sal (NaCl, KCl e CaCl2) e concentração (30 300 mM), pH da
fase aquosa (pH 3,0 12,0) e concentração do surfactante (5 - 100 mM AOT), foram
investigados. Os parâmetros avaliados para a reextração foram: pH da fase aquosa (pH 5,0
7,0) e força iônica (50 - 1000 mM de KCl) tendo sido adicionado ao sistema 5% Butanol.
Os parâmetros velocidade de agitação (900 rpm), temperatura (25oC) e concentração de
proteína (0,374 mg/ml), foram mantidos constantes em todos os experimentos. Os melhores
resultados para extração foram obtidos com 5 min de tempo de contanto entre as duas
fases, 30 mM de NaCl, tampão citrato/fostato pH 5,5 e 5 mM de AOT, onde foi possível
obter extrações protéicas de 100 % e 70 % para CrataBL e EB, respectivamente. Para a
reextração, as melhores condições foram, tampão citrato/fosfato 10 mM, pH 5,5 acrescido
de 1000 mM de KCl, onde foi possível obter uma recuperação protéica de 45,25 %
(CrataBL) e 80,65 % (EB) com 50 % da atividade hemaglutinante para ambas as amostras.
As amostras obtidas com as melhores condições de extração e reextração aplicadas ao EB
revelaram apenas uma banda na PAGE para proteínas básicas e duas bandas no SDSPAGE.
A cromatografia de gel filtração (AKTA) indicou dois picos: um de 40 KDa e outro
de 29 KDa. A natureza oligomérica da lectina foi detectada por cromatografia de filtração
em gel e SDS-PAGE. A comparação dos perfis cromatográficos de filtração em gel do EB
com o da lectina purificada, indicaram a eficiência do sistema de micelas invertidas na
purificação da lectina
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2001 |
| Date | January 2006 |
| Creators | de Oliveira Nascimento, Cynthia |
| Contributors | das Graças Carneiro da Cunha, Maria |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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