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Previous issue date: 2014-03-27 / 2019-05-27 / A abordagem metagen?mica tem permitido o acesso ao material gen?tico de microrganismos n?o cultivados e tem sido usada para identifica??o de novos genes. Apesar da import?ncia dos mecanismos de reparo de DNA para a manuten??o da integridade gen?mica nosso conhecimento sobre mecanismos de reparo de DNA ? baseado em organismos modelo como E. coli e pouco ? conhecido sobre os organismos de vida livre e n?o cultivados. Neste trabalho, a abordagem metagen?mica foi aplicada para descobrir novos genes envolvidos com a manuten??o da integridade gen?mica. Um clone positivo foi identificado por replicar a biblioteca metagen?mica em meio seletivo contendo H2O2. O clone metagen?mico foi capaz de complementar parcialmente a defici?ncia em reparo de DNA de cepas simples e duplo-mutantes de E.coli (recA e xthA nfo, respectivamente) submetidas ao estresse gerado por H2O2 e MMS.A an?lise de sequ?ncia mostrou uma ORF codificando para uma prote?na hipot?tica membro da superfam?lia Exo_Endo_Phos (PF03372) e, a filogenia indicou que a mesma n?o est? inclusa em nenhuma das subfam?lias EEP. Assim, uma nova nuclease foi identificada e experimentalmente caracterizada in vivo e in vitro. Ensaios espec?ficos utilizando a nuclease purificada e oligonucleotideos fluorescentemente marcados revelaram sua atividade 3?-5?exonuclease, em substratos simples e dupla-fita, dependente de Magn?sio e sens?vel a EDTA. Uma vez que este ? o primeiro relato e caracteriza??o de uma enzima obtida a partir de abordagem metagen?mica mostrando uma atividade exonuclease, foi nomeada EXOMEG1
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/19374 |
| Date | 27 March 2014 |
| Creators | Silva, Rita de C?ssia Barreto da |
| Contributors | 00297997750, http://lattes.cnpq.br/1083882171718362, Uch?a, Adriana Ferreira, 58024867320, http://lattes.cnpq.br/6644671747055211, Scortecci, Katia Castanho, 13451112825, http://lattes.cnpq.br/4808910380593455, Machado, Carlos Renato, 71055886672, http://lattes.cnpq.br/6306925202374274, Henriques, Joao Antonio P?gas, 08229813000, http://lattes.cnpq.br/0251361943436465, Fuchs, Robert P., Lima, Lucymara Fassarella Agnez |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, PROGRAMA DE P?S-GRADUA??O EM CI?NCIAS DA SA?DE, UFRN, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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