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Previous issue date: 2014-10-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The majority of species in the genus Anastrepha is endemic to the Neotropics and many are of great economic importance because they inflict great damage to several different fruit crops. Brazil has low insertion in international markets because of the demand for quality products with no pesticide residues, which force the improvement of control techniques. Thus, an alternative to insect pests control is the Sterile Insect Technique (SIT), which reduces the pest population by mass release of sterile insects. However, sterilization by radiation has many side effects, reducing the competitiveness of released males relative to wild males. For this reason, different strategies have been used, such as the production of transgenic individuals not only in order to sterility but also increasing the vitality presented by these males compared to wild males. To accomplish that, an important approach could be the study of genes involved in the reproductive process. In this work, we selected nine candidate genes for expression studies of our transcriptome data, which have the potential of being involved in the reproductive process in Anastrepha because they belong to gene families that have already been associated to the reproductive process, and showed differential expression between the contrast of virgin and post-mating of transcriptome data in Anastrepha flies. Since no qPCR study has been done to date in Anastrepha, we tested several reference genes for normalization of expression data. The genes Rpl18, Rps17 and Ef1a were deemed suitable and used here to standardize studies of expression between life stages of A. obliqua. The qPCR gene expression analysis revealed interesting gene expression patterns for AttA, Obp56a and Obp99c, which increases the potential of these genes being involved in the reproductive process. Obp56a showed a higher expression in virgin females in contrast to postmating, whereas AttA and Obp99c showed higher expression in male in contrast to females, which may be interesting for genetic control techniques. We applied the RNAi silencing technique with AttA and Obp99c, aiming to generate information about the participation of these genes in reproduction. Thus, our results pointed for three candidate genes that could be interesting for
population control techniques, with potential of being involved in the reproductive process, which
stimulates further researches in Anastrepha obliqua. / A maioria das espécies do gênero Anastrepha é endêmica à região neotropical e diversas têm importância econômica por causar grandes prejuízos às culturas de frutos. O Brasil tem baixa inserção no mercado internacional de frutas frescas devido às exigências por produtos de qualidade e sem resíduos de agrotóxicos, o que força o aprimoramento das técnicas de controle de insetospraga. Uma das alternativas é a Técnica do Inseto Estéril (SIT), que visa à redução da população
da praga pela liberação em massa de insetos estéreis. Porém, a esterilização por radiação traz muitos efeitos colaterais, diminuindo a competitividade dos machos liberados em relação aos machos selvagens. Por esse motivo, diferentes estratégias têm sido utilizadas como a produção de indivíduos transgênicos visando não só a esterilidade como também o aumento do vigor apresentado por esses machos em relação aos selvagens. Para isso, uma abordagem importante
seria o estudo de genes envolvidos no processo reprodutivo. Neste trabalho selecionamos nove genes para estudos de expressão por qPCR candidatos de nossos dados de transcriptomas com potencial de estarem envolvidos no processo reprodutivo em Anastrepha por pertencerem a famílias já relacionadas ao processo reprodutivo, além de apresentarem expressão diferencial entre os transcriptomas de machos virgens e machos pós-cópula. Como nenhum estudo de qPCR havia
sido feito ainda em Anastrepha, testamos diversos genes de referência para a normalização dos dados de expressão. Os genes rpl18, rps17 e ef1a foram considerados adequados e padronizados para estudos de expressão entre fases de vida de A. obliqua. As análises de expressão por qPCR revelaram que os genes AttA, Obp56a e Obp99c apresentam padrões de expressão interessantes para investigação e aumentam o potencial desses genes estarem de fato participando do processo
reprodutivo. Obp56a apresentou maior expressão em fêmeas virgens em relação às pós-cópula. Já AttA e Obp99c apresentaram maior expressão em machos em relação às fêmeas, fato que pode ser interessante para técnicas de controle genético. Aplicamos a técnica de silenciamento por interferência por RNA nesses genes, com o objetivo de trazer informações sobre a participação desses genes na reprodução. Dessa forma nossos resultados apontam para três genes candidatos
que podem ser interessantes para técnicas de controle de populações, com potencial de estar participando do processo reprodutivo o que estimula futuras investigações destes em Anastrepha obliqua.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/7325 |
| Date | 31 October 2014 |
| Creators | Nakamura, Aline Minali |
| Contributors | Brito, Reinaldo Alvarenga Alves de |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Câmpus São Carlos, Programa de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular, UFSCar |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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