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Previous issue date: 2016-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cancer is a group of diseases related to abnormal cell growth and ability to invade
tissues. These skills result in the development of metastases, leading to death in many of
the patients. During the process of invasion, the cells find a connective tissue rich in
fibronectin and collagen in which they will have to go through in order to reach the
blood vessels and then the metastatic site. Fibronectin adhesion receptors such as αvβ3
and α5β1 integrins are essential for cells to be able to move through the fibronectin
fibers. Integrins bind to the extracellular matrix (ECM) proteins via the RGD motif
present in fibronectin, making these cell types migration receptors a potential target for
the study of cancer. Thus, the effect of DisBa-01, an RGD containing motif disintegrin,
was investigated in two cell specialized on migration; fibroblasts (BJ) and oral
squamous cell carcinoma (SCC25). DisBa-01 (1 and 2 μM) was able to reduce cancer
cells migration speed and directionality, but not fibroblasts, on time-lapse experiments
performed on fibronectin coated plates. In order to understand if the effect of DisBa-01
is associated with alterations in cellular adhesion, cells were plated on fibronectin and
stained with anti-paxillin. Images acquired by confocal microscopy show changes in
focal adhesions, which have become larger and more numerous. These data were
confirmed, by time-lapse assays using Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) in
cells transfected with paxillin. The expression of key fibronectin receptors, α5, β3 and
αv is present similarly in both strains, while the β1 subunit is expressed in lower
amounts in OSCC cells. To investigate the probable relationship of migration inhibition
with integrin β3 level, this subunit was overexpressed in the OSCC cells and all
parameters analyzed were restored. Taken together, these results demonstrate the ability
of DisBa-01 to affect cell migration depending on integrin expression level and by
modulating the dynamics of cell adhesions. / O câncer representa um conjunto de doenças relacionadas ao crescimento anormal de
células e sua capacidade de invadir tecidos. Essas habilidades resultam no
desenvolvimento de metástases, que levam muitos dos pacientes acometidos por essa
doença, à morte. Durante o processo de invasão as células encontram um tecido
conectivo rico em fibronectina e colágeno, o qual terão que atravessar a fim de chegar
aos vasos sanguíneos e posteriormente ao sítio metastático. Receptores de adesão a
fibronectica como a αvβ3 e α5β1 são essenciais para que as células sejam capazes de se
movimentar sobre as fibras dessa protéína. A integrinas se ligam a fibronectina através
do motivo RGD presente, fazendo desses receptores, potenciais alvos no estudo da
migração celular durante o câncer. Assim, o efeito da DisBa-01, uma desintegrina com
motivo RGD, foi investigado em duas células especializadas em migração; fibroblastos
(BJ) e uma linhagem de carcinoma de células escamosas oral (SCC25). A DisBa-01 (1 e
2 μM) foi capaz de diminuir a velocidade de migração e a direcionalidade das células
de câncer, mas não dos fibroblastos, em ensaios de time-lapse realizados em placas
recobertas por fibronectina. Com o objetivo de entender se o efeito da DisBa-01 está
relacionado com alterações na adesões celulares, as células foram plaqueadas sobre
fibronectina e marcadas com anti-paxilina. Nas imagens adquiridas através de
microscopia confocal é possível visualizar mudanças nas adesões, que se tornaram
maiores e mais numerosas. Dados que foram confirmados em ensaios de time-lapse
utilizando a microscopia de fluorescência de reflecção interna total (TIRF – Total
Internal Reflection Fluorescence) em células transfectadas com paxilina. A expressão
dos principais receptores de fibronectina, α5, αv e β3 está presente de forma similar nas
duas linhagens, enquanto a subunidade β1 é expressa em quantidades menores nas
células OSCC. Para investigar a provavel relação da inibição da migração com a
expressão da integrina β3, a mesma foi superexpressa em nas células de OSCC e todos
os parâmetros analizados foram normalizados. Em conjunto, esses resultados
demonstram a capacidade da DisBa-01 de afetar a migração celular dependendo do
nível de expressão de integrinas e através da modulação da dinâmica das adesões.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/8845 |
| Date | 28 April 2016 |
| Creators | Montenegro, Cyntia de Freitas |
| Contributors | Araújo, Heloisa Sobreiro Selistre de |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Câmpus São Carlos, Programa de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular, UFSCar |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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